汽车不开电瓶会跑电吗泳配的胶会很软,不知道什么原因

胶跑了会熔解是怎么回事(电泳,电泳槽,缓冲液,加样孔)
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[胶跑了会熔解是怎么回事(电泳,电泳槽,缓冲液,加样孔)] 六一厂DYCP-31BM的电泳槽,胶大小6×6cm,电压50-60v,电泳时间35-45min,发现加样孔以上的部位经常会被热熔了,一直找不出原因,我用的缓冲液是TAE。请大家指点,谢谢! 关键词:[电泳槽 电泳 加样孔 缓冲液]…
六一厂DYCP-31BM的电泳槽,胶大小6×6cm,电压50-60v,电泳时间35-45min,发现加样孔以上的部位经常会被热熔了,一直找不出原因,我用的缓冲液是TAE。请大家指点,谢谢!
看看你电泳时的电流吧,如果电流太大(一般超过100mA),电泳液就会很热,胶就容易熔,也会对电泳的效果有影响。电泳过热一般与缓冲液的离子量有关,离子太多,导致电流过大,产热就过多。解决的方法有:1.选择合适的缓冲液,注意离子浓度。1×TAE和0.5×TBE均可,我们用0.5×TBE为缓冲液,稳压120V,电流只有30-60mA。2.如果稳压电泳,电流太大,可改成稳流电泳,一般100mA以下,就可以控制过热。3.加冰浴冷却降温,就不会熔胶了。4.电泳液用了几次以后,离子会增多,电泳热量会升高,要及时更换电泳液。以上方法请根据你的实际情况选用。电泳时的电流也不太大啊,一般电流是40-50mA,我用的电泳槽是DYCP-31BM,新鲜配制的TAE跑也是接近40mA,可是跑久一点就会熔。但是有的时候又不会,没个准。会不会是电泳槽的问题,我在另外一间实验室跑,100V电压,跑完胶都发烫也不熔,搞不懂真的很奇怪,没遇过这样的事。我也不知道是什么原因,只能尽量帮你找原因了:1.你的糖胶浓度是多少,是用几乘的缓冲液配的?是不是胶的浓度太大,或配胶的缓冲液太浓(我们用0.5×TBE)。2.糖的品种是否合适,是不是错用了融点过低的琼脂糖。3.电泳槽用久了,会残留很多的沉淀,把槽子刷一下,看能不能好点。4.预先将电泳放4度冷却,然后冰浴下(或加冰袋)电泳。我也只能想到这些,希望能有帮助。楼上的朋友提了不少好的建议,收获不小,我再班门弄斧,多说两句把,现在问题还没解决的话,考虑应该是在电泳过程中产生了大量的离子,原因在于琼脂糖,建议尽量使用高纯度的琼脂糖制品. 另外,如果跑的是RNA样品的话,还要注意:1.RNA样品极易分解,操作时注意戴上手套,并应严格防止RNase的污染.2.配制好的RNA电泳用样品应立即使用,不得长期保存.用的是6×6cm的胶,在别人实验室跑的时候用的是他们的电泳槽,比我自己的DYCP-31BM的大,缓冲液用1×TAE,在他们那儿怎么跑都不熔,在自己实验室跑的就不行了,是不是缓冲液不能重复使用??缓冲液可以重复使用,使用次数根据情况,一般5-10次,如果缓冲液离子多了,电流太大了,就应更换。电泳槽一般应该没什么问题,我们用的也是国产槽,效果和BIO-RAD的一样。胶的大小问题不大,重要的是浓度和和品质。不知道你们都用哪产的琼脂糖,我用的是博亚的琼脂糖我们用的是TaKaRa的琼脂糖,效果不错。
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请高手指教是什么原理?
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1.选择合适的Marker2.配胶的缓冲液与电泳缓冲液要是同一种,且浓度一致(1倍)3.点样时要加入loading buffer,并注意,不要将样点到点样孔之外(飘样),也不要将胶戳漏(漏样)4.根据片段大小,及电泳检测目的,选择合适的电压及电泳时间5.EB染色.可选择制胶时加入EB(要在溶玩胶后,且温度至室温时(用手握住制胶容器,不烫手即可));或电泳结束后,将胶放入EB溶液中染色.
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