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凯氏定氮法测定蛋白质的含量测定中氨基酸含量的主要步骤有哪些
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凯氏定氮法对食品中蛋白质含量的测定
实验方法原理
蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。因为食品中除蛋白质外，还含有其它含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋白。
试剂、试剂盒
1. 硫酸铜（CuSO4·5H20）2. 硫酸钾3. 硫酸（密度为1.8419g/L）4. 硼酸溶液（20g/L）5. 氢氧化钠溶液（400g/L）6. 0.01mol/L盐酸标准滴定溶液7. 混合指
仪器、耗材
1. 微量定氮蒸馏装置2. 电炉3. 水蒸气发生器（2L平底烧瓶）4. 螺旋夹a5. 小漏斗及棒状玻璃塞（样品入口处）6. 反应室7. 反应室外层8. 橡皮管及螺旋夹b9. 冷凝管10. 蒸馏液接收瓶
1. 样品消化称取黄豆粉约0.3g（±0.001g），移入干燥的100mL凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜和6g硫酸钾，稍摇匀后瓶口放一小漏斗，加入20mL浓硫酸，将瓶以450角斜支于有小孔的石棉网上，使用万用电炉，在通风橱中加热消化，开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透明后，继续加热0.5h，取下放冷，小心加20mL水，放冷后，无损地转移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用，即为消化液。试剂空白实验：取与样品消化相同的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定容至100mL，得试剂空白消化液。2. 定氮装置的检查与洗涤检查微量定氮装置是否装好。在蒸气发生瓶内装水约三分之二，加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠（或沸石）以防止暴沸。测定前定氮装置如下法洗涤2~3次：从样品进口入加水适量（约占反应管三分之一体积）通入蒸汽煮沸，产生的蒸汽冲洗冷凝管，数分钟后关闭夹子a，使反应管中的废液倒吸流到反应室外层，打开夹子b由橡皮管排出，如此数次，即可使用。3. 碱化蒸馏量取硼酸试剂20mL于三角瓶中，加入混合指示剂2~3滴，并使冷凝管的下端插入硼酸液面下，在螺旋夹a关闭，螺旋夹b开启的状态下，准确吸取10.0mL样品消化液，由小漏斗流入反应室，并以10mL蒸馏水洗涤进样口流入反应室，棒状玻塞塞紧。使10mL氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，用少量水冲洗立即将玻塞盖坚，并加水于小玻杯以防漏气，开启螺旋夹a，关闭螺旋夹b，开始蒸馏。通入蒸汽蒸腾10min后，移动接收瓶，液面离开凝管下端，再蒸馏2min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下三角瓶，准备滴定。同时吸取10.0mL试剂空白消化液按上法蒸馏操作。4. 样品滴定以0.01mol/L盐酸标准溶液滴定至灰色为终点。5. 数据记录项 目第一次第二次第三次样品消化液（mL）滴定消耗盐酸标准溶液（mL）消耗盐酸标准溶液平均值（mL）6. 结果计算式中 X——样品蛋白质含量（g/100g）；V1——样品滴定消耗盐酸标准溶液体积（mL）；V2——空白滴定消耗盐酸标准溶液体积（mL）；c——盐酸标准滴定溶液浓度（mol/L）；0.0140 ——1.0mL盐酸标准滴定溶液相当的氮的质量（g）；m——样品的质量（g）；F——氮换算为蛋白质的系数，一般食物为6.25；乳制品为6.38；面粉为5.70；高梁为6.24；花生为5.46；米为5.95；大豆及其制品为5.71；肉与肉制品为6.25；大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83；芝麻、向日葵5.30。计算结果保留三位有效数字。
1. 本法也适用于半固体试样以及液体样品检测。半固体试样一般取样范围为2.00g~5.00g；液体样品取样10.0mL~25.0mL（约相当氮30mg~40mg）。若检测液体样品，结果以g/100mL表示。2. 消化时，若样品含糖高或含脂及较多时，注意控制加热温度，以免大量泡沫喷出凯氏烧瓶，造成样品损失。可加入少量辛醇或液体石蜡，或硅消泡剂减少泡沫产生。3. 消化时应注意旋转凯氏烧瓶，将附在瓶壁上的碳粒冲下，对样品彻底消化。若样品不易消化至澄清透明，可将凯氏烧瓶中溶液冷却，加入数滴过氧化氢后，再继续加热消化至完全。4. 硼酸吸收液的温度不应超过40℃，否则氨吸收减弱，造成检测结果偏低。可把接收瓶置于冷水浴中。5. 在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
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location.href=&http://www.bio360.net/join/register&;0# &&&发表于： 10:24:28
酱油是我们日常生活中不可或缺的调味品之一,是我国传统的酿造食品,以大豆为主要原料,进行微生物发酵,将蛋白质分解为肽、胨及氨基酸,使产品具有鲜味,且具有丰富的营养。全氮指标是衡量酿造酱油产品质量好坏的重要指标之一,所以对产品检验结果的准确性应严格把握。国家标准检测方法《GB&酿造酱油》中采用凯氏定氮法测定酱油中全氮的含量,其测量不确定度来源于样品移取、消化、蒸馏、稀释标准溶液及滴定等过程，其经典仪器为定氮仪。通过对各个不确定度分量的计算合成,找出影响测量不确定度的因素,并对各个不确定度分量进行评估,最终给出样品中全氮含量的标准不确定度及扩展不确定度。1&实&&&很抱歉，只有登录用户才能查看完整内容，请您先 如不是本网用户，请酱油是我们日常生活中不可或缺的调味品之一,是我国传统的酿造食品,以大豆为主要原料,进行微生物发酵,将蛋白质分解为肽、胨及氨基酸,使产品具有鲜味,且具有丰富的营养。全氮指标是衡量酿造酱油产品质量好坏的重要指标之一,所以对产品检验结果的准确性应严格把握。国家标准检测方法《GB&酿造酱油》中采用凯氏定氮法测定酱油中全氮的含量,其测量不确定度来源于样品移取、消化、蒸馏、稀释标准溶液及滴定等过程，其经典仪器为。通过对各个不确定度分量的计算合成,找出影响测量不确定度的因素,并对各个不确定度分量进行评估,最终给出样品中全氮含量的标准不确定度及扩展不确定度。1& 实验操作及数据1.1& 方法依据及原理按《GB&酿造酱油》6.&3&规定的方法进行。酱油与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解的氨与硫酸结合成硫酸铵,然后加碱蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后,再以盐酸标准溶液滴定,根据盐酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质的含量。1.&2& 实验条件及操作简述实验室温度在(20&±5)&℃,样品混匀后,&取2.00&mL酱油消化,&消化完全后,&加碱蒸馏,&用2.&00&mL硼酸溶液接收,用0.&1012&moL/&L&盐酸标准溶液滴定馏出液至紫红色为终点,记录消耗盐酸标准溶液的体积V&为10.&20&,10.&00&,10.&10&,10.&00&,10.&10&,10.&20&mL&,同时作空白试验V0&为0.&30&mL&。1.3& 评定依据JJ&F&测量不确定度评定与表示。2& 测量数学模型根据公式:&X&=&其中:X& 样品中蛋白质的含量,g/&L&;V& 样品消耗盐酸标准溶液的体积,mL&;V0& 试剂空白消耗盐酸标准溶液的体积,mL&;CHCL& 盐酸标准溶液的浓度,moL/&L&;V2& 用2.&00&mL&移液管移取样品消化液的体积,mL&;0.&014& 1moL/&L&盐酸标准溶液1mL&相当于氮的克数;数学模型可以简化为:&X&=&由此可以看出:对测量结果不确定度有影响的因素主要是取样量、消耗盐酸标准溶液的体积数及盐酸标准溶液的浓度。从数学模型可以看出,各影响参数相互独立,各参数的不确定度直接对检测结果不确定度产生影响,合成标准不确定度可用相对标准不确定度进行合成,&按照JJ&F&中6.&7&,合成标准不确定度u&(C)&进一步演化为对X&的相对合成标准不确定度的估算为：&其中:&uc&(&X)& X&的合成标准不确定度,g/&L&;u(&rep)& 重复实验的标准不确定度;u(V&-&V&0&)& 样品扣除试剂空白后消耗盐酸标准溶液带来的标准不确定度,mL&;u(&CHCl&)& 盐酸标准溶液浓度的标准不确定度,moL/&L&;u(V&1&)& 用2.&00&mL&移液管移取样品消化液带来的标准不确定度,mL&。3& 不确定度来源分析从分析过程和数学模型分析,全氮测定不确定度的来源主要是样品取样、消化、蒸馏、滴定、标准溶液消耗体积及重复检测所带来的不确定因素,还有实验室环境条件变化带来的不确定度,综合归纳见图1&。4& 不确定度分量量化关 键 词：&&&&&
1# &&&回复于： 10:24:57
4&不确定度分量量化4.1&样品复测带来的不确定度,属A&类标准不确定度重复6&次测定蛋白质含量所引起的不确定度,主要考虑A&类不确定度。4.2&样品扣除试剂空白后消耗盐酸标准溶液带来的标准不确定度u(V&-&V0&)&的量化10&mL&滴定管的标准不确定度来源:&①滴定管的不确定度,按检定证书给定为±0.&02&mL&,按照均匀分布换算成标准不确定度u1&。②滴定体积的重复性,已通过重复性实验考虑过了,包含在u(A)&nbs&&&很抱歉，只有登录用户才能查看完整内容，请您先 如不是本网用户，请
2# &&&回复于： 10:25:55
相对标准不确定度为:&&&&&&很抱歉，只有登录用户才能查看完整内容，请您先 如不是本网用户，请江南大学食品生物化学双语教学课程
1- 蛋白质化学
发布日期：2008年5月 编辑:管理员 浏览次数：5804
蛋白质化学
（一）&& 两性离子（dipolarion）与两性化合物
（二）&& 等电点(isoelectric point,pI)与等离子点
（三）&& 必需氨基酸（essential amino acid）
（四）&& 稀有氨基酸(rare amino acid)
（五）&& 非蛋白质氨基酸(nonprotein amino acid)
（六）&& 构型(configuration)与构象(conformation)
（七）&& 肽键、肽平面、肽单位、多肽&
（八）&& N末端与C末端
（九）&& 蛋白质的一级结构(protein primary structure)
（十）&& 蛋白质的二级结构(protein secondary structure)&
（十一）&&&&&&&&&&&&& 蛋白质的α－螺旋结构
（十二）&&&&&&&&&&&&& 蛋白质的β－折叠结构
（十三）&&&&&&&&&&&&& 结构域(domain)
（十四）&&&&&&&&&&&&& 超二级结构(super-secondary structure)
（十五）&&&&&&&&&&&&& 蛋白质的三级结构(protein tertiary structure)
（十六）&&&&&&&&&&&&& 蛋白质的四级结构(protein quaternary structure)
（十七）&&&&&&&&&&&&& 寡聚体（multimeric protein）与亚基（subunit）
（十八）&&&&&&&&&&&&& 氢键(hydrogen bond) 、离子键(ionic bond)、．
（十九）&&&&&&&&&&&&& 疏水的相互作用 (hydrophobic interaction)、范德华力( van der Waals force)
（二十）&&&&&&&&&&&&& 简单蛋白与结合蛋白
（二十一）&&&&&& 糖蛋白与脂蛋白
（二十二）&&&&&& 盐析(salting out)与盐溶(salting in)
（二十三）&&&&&& 蛋白质的变性(denaturation)与蛋白质的复性(renaturation)&&&&&&&&&&&
（二十四）&&&&&& 蛋白质的沉淀作用(precipitation)
（二十五）&&&&&& 沉降系数s（sedimentation coefficient）与S（svedberg单位）
（二十六）&&&&&& 变构蛋白质与变构作用（allosteric effect）
（二十七）&&&&&& 透析（dialysis）与超滤（ultrafiltration）
（二十八）&&&&&& PAGE（PA gel electrophoresis）&
&(二)& 填空题
1．& 蛋白质多肽链中的肽键是通过一个氨基酸的_____基和另一氨基酸的_____基连接而形成的。
2．& 大多数蛋白质中氮的含量较恒定，平均为___%，如测得1克样品含氮量为10mg,则蛋白质含量为____%。
3．& 在20种氨基酸中，酸性氨基酸有_________和________2种，具有羟基的氨基酸是________和_________，能形成二硫键的氨基酸是__________.
4．& 蛋白质中的_________、___________和__________3种氨基酸具有紫外吸收特性，因而使蛋白质在280nm处有最大吸收值。
5．& 精氨酸的pI值为10.76,将其溶于pH7的缓冲液中，并置于电场中，则精氨酸应向电场的_______方向移动。
6．& 组成蛋白质的20种氨基酸中，含有咪唑环的氨基酸是________，含硫的氨基酸有_________和___________。
7．& 蛋白质的二级结构最基本的有两种类型，它们是_____________和______________。
8．& α-螺旋结构是由同一肽链的_______和& ________间的___键维持的，螺距为______,每圈螺旋含_______个氨基酸残基，每个氨基酸残基沿轴上升高度为_________。天然蛋白质分子中的α-螺旋大都属于___手螺旋。
9．& 在蛋白质的α-螺旋结构中，在环状氨基酸________存在处局部螺旋结构中断。10．球状蛋白质中有_____侧链的氨基酸残基常位于分子表面而与水结合，而有_______侧链的氨基酸位于分子的内部。
10．&&&&&&&&&&&&& 氨基酸与茚三酮发生氧化脱羧脱氨反应生成______色化合物，而________与茚三酮反应生成黄色化合物。
11．&&&&&&&&&&&&& 维持蛋白质的一级结构的化学键有_______和_______；维持二级结构靠________键；维持三级结构和四级结构靠_________键，其中包括________、________、________和_________.
12．&&&&&&&&&&&&& 稳定蛋白质胶体的因素是__________________和______________________。
13．&&&&&&&&&&&&& GSH的中文名称是____________，它的活性基团是__________，它的生化功能是____________________。
14．&&&&&&&&&&&&& 加入低浓度的中性盐可使蛋白质溶解度________，这种现象称为________，而加入高浓度的中性盐，当达到一定的盐饱和度时，可使蛋白质的溶解度______并__________,这种现象称为_______,蛋白质的这种性质常用于_____________。
15．&&&&&&&&&&&&& 用电泳方法分离蛋白质的原理，是在一定的pH条件下，不同蛋白质的________、_________和___________不同，因而在电场中移动的_______和_______不同，从而使蛋白质得到分离。
16．&&&&&&&&&&&&& 氨基酸处于等电状态时，主要是以________形式存在，此时它的溶解度最小。
17．&&&&&&&&&&&&& 鉴定蛋白质多肽链氨基末端常用的方法有__________和_______________。
18．&&&&&&&&&&&&& 测定蛋白质分子量的方法有_________、____________和__________________。
19．&&&&&&&&&&&&& 今有甲、乙、丙三种蛋白质，它们的等电点分别为8.0、4.5和10.0,当在pH8.0缓冲液中，它们在电场中电泳的情况为：甲_______，乙_______，丙________。
20．&&& 当氨基酸溶液的pH=pI时，氨基酸以_____离子形式存在，当pH&pI时，氨基酸以_______离子形式存在。
21．&&&&&&&&&&&&& 谷氨酸的pK1(α-COOH)＝2.19,& pK2 (α-NH+3 ) = 9.67,& pKR(R基)= 4.25,谷氨酸的等电点为__________。
22．&&&&&&&&&&&&& 天然蛋白质中的α―螺旋结构，其主链上所有的羰基氧与亚氨基氢都参与了链内_____键的形成，因此构象相当稳定。
23．&&&&&&&&&&&&& 将分子量分别为a（90 000）、b（45 000）、c（110 000）的三种蛋白质混合溶液进行凝胶过滤层析，它们被洗脱下来的先后顺序是_____________。
24．&&&&&&&&&&&&& 肌红蛋白的含铁量为0.34%，其最小分子量是______.血红蛋白的含铁量也是0.34%，但每分子含有4个铁原子，血红蛋白的分子量是________.
25．&&&&&&&&&&&&& 一个α-螺旋片段含有180个氨基酸残基，该片段中有_____圈螺旋？该α-螺旋片段的轴长为_____.
26．&&&&&&&&&&&&& 氨酸的结构通式为 。
27．&&&&&&&&&&&&& 在pH7.0的缓冲液中，向阴极移动的氨基酸是______、_______和_____。
28．&&&&&&&&&&&&& 肽链中,共有______个原子同在一个肽平面上。
29．&&&&&&&&&&&&& β-折叠结构的氢键是由邻近两条肽链中一条的______基因与另一条的_____基之间所形成。
30．&&&&&&&&&&&&& 维持蛋白质一级结构的化学键有______和_______；维持蛋白质二级结构的力是_____；a螺旋是链______氢键，而维持三、四级结构靠______、______、______、______和______。
31．&&&&&&&&&&&&& 分离纯化蛋白质常用的盐析剂是_______。
32．&&&&&&&&&&&&& 电泳是在一定的_______下，根据各种蛋白质分子本身的_____和_____不同，因而在电场中移动的______不同而进行分离的方法。
33．&&&&&&&&&&&&& 某糖元磷酸化酶α经SDS―PAGE测得其分子量为90000，而经凝胶过滤法测得分子量为360000，正确的解释是______。
34．&&&&&&&&&&&&& 分离蛋白质混合物的各种方法主要根据蛋白质在溶液中的_______、_____、_____、______性质。
35．&&&&&&&&&&&&& 天然蛋白分子中α-螺旋大多属于_______手螺旋。
36．&&&&&&&&&&&&& 蛋白质在等电点时溶解度最______，粘度最_______，导电性最______。
37．&&&&&&&&&&&&& 用分光光度法测定蛋白质在280nm有吸收，这是因为蛋白质分子中的_____、______和______三种氨基酸残基侧链基团起作用。
38．&&&&&&&&&&&&& 将下列反应填入相应的空格内。①坂口反应；②福林酚反应；③ 茚三酮反应；④双缩脲反应；⑤乙醛酸反应。 Tyr发生_____，多肽发生______，色氨酸发生______，氨基酸发生_____，精氨酸发生_____。
39．&&&&&&&&&&&&& 组成蛋白质分子的碱性氨基酸有 、 和 。酸性氨基酸有 和 。
40．&&&&&&&&&&&&& 在下列空格中填入合适的氨基酸名称。
（1） & 是带芳香族侧链的极性氨基酸。
（2） 和 是带芳香族侧链的非极性氨基酸。
（3） 是含硫的极性氨基酸。
（4） 或 是相对分子质量小且不含硫的氨基酸，在一个肽链折叠的蛋白质中它能形成内部氢键。
（5）在一些酶的活性中心中起重要作用并含羟基的胡性较小的氨基酸是 。
41．氨基酸在等电点时，主要以 离子形式存在，在pH＞pI的深溶液中，大部分以 离子形式存在，在pH＜pI的溶液中，大部分以 离子形式存在。
42．在生理条件下（pH7.0左右），蛋白质分子中的 侧链和 侧链几科完全带正电荷，但是 侧链则带部分正电荷。
43．脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生 色的物质，而其他氨基酸与茚三酮反应产生 色的物质。
44．范斯莱克（Van Slyke）法测定氨苛氮主要利用 与 作用生成 。
45．实验室常用的甲醛滴业是利用氨基酸的氨基与中性甲醛瓜，然后用碱（NaOH）滴定 上放出来的 。
46．通常查用紫外分光光度测定蛋白质含量，这是因为蛋白质分子中的 、
和 三种氨基酸的共轭双键有紫外吸收能力。
47．寡肽通常是指由 个到 个氨基酸组成的肽。
48．氨基酸的等电点（pI）是指 。
49．在一些天然肽中含有 、 、和 等特殊结构。这些结构在蛋白质中是不存在的。很可能这些结构上的变化可使这些肽免受蛋白水解酶的作用。
50．常用的拆开蛋白质分子中二硫键的方法有 法，常用的试剂为 ；
法，常用的试剂为 或 。
51．蛋白质之所以出现各种内容丰富的构象是因为 键和 键能有不同程度的转动。
52．在蛋白质分子中相邻氨基酸残基的&-碳原子如具有侧链会使α螺旋不稳定。因此当 、 和 三种氨基酸相邻时，会破坏α螺旋。
53．在α螺旋中C＝O和N－H之间形成的氢键最稳定，因此这三个原子以 排列。
54．Pauling等人提出的蛋白质α螺旋模型，每圈螺旋包含 个氨基酸残基，高度为 。每个氨基酸残基沿轴上升 ，并沿轴螺旋 度。
55．在糖蛋白中，糖可与蛋白质的 、 、 或 残基以O-糖苷键相连，或与 残基以N-糖苷键相连。
56．当蛋白质的非极性侧链避开水相时，疏水作用导致自由能 。
57．一般来说，球状蛋白质的 性氨基酸侧链位于分子内部， 性氨基酸侧链位于分子表面。
58．两条相当伸展的肽链（或同一条肽链的两个伸展的片段）之间形成氢键的结构单元称为 。
59．维持蛋白质构象的化学键有 、 、 、 、
和 。
60．血红蛋白（Hb）与氧结合的过程呈现 效应，是通过Hb的 现象实现的。
61．当溶液中盐离子强度低时，可增加蛋白质的溶解度，这种现象称 。当溶液中盐离子强度高时，可使蛋白质沉淀，这种现象称 。
61．DEAE-纤维素是一种 交换剂，CM-纤维素是一种 民交换剂。
62．一个带负电荷的蛋白质可牢固地结合到阴离子交换剂上，因此需要一种比原来缓冲液pH值 和离子强度 的缓冲液，才能将蛋白质洗脱下来。
63．利用蛋白质不能通过半透膜的特性，使它和其他小分子物质分开的方法有
和 。
64．实验室中常用的测定相对分子质量的方法有 、 和 等。
65．胰岛素原转变为胰岛素的过程是在 （细胞器）进行。分泌颗粒中的胰岛素是通过 离子与 氨酸残基侧链上的氮原子配位，形成 聚体。
66．测定蛋白质浓度的方法主要有 、 、 、和 。
67．常用的肽键N端分析的方法有 法、 法、 法和 法。C端分析的方法有 法 和 法等。
68．蛋白质的超二级结构是指 ，其基本组合形式为 、 、 、 、 和 等。
69．蛋白质的二级结构有 、 、 、 和 等几种基本类型。
(三) 选择题
1．在生理pH条件下，下列哪种氨基酸带正电荷？
A．丙氨酸&&&&&&&&& B．酪氨酸&&&&&&&&& C．赖氨酸
D．蛋氨酸&&&&&&&&& E．异亮氨酸
2．下列氨基酸中哪一种是非必需氨基酸？
A．亮氨酸&&&&&&&&& B．酪氨酸&&&&&&&&&& C．赖氨酸
D．蛋氨酸&&&&&&&&& E．苏氨酸
3．蛋白质的组成成分中，在280nm处有最大吸收值的最主要成分是：
A．酪氨酸的酚环&&&&&&& &&&&&&B．半胱氨酸的硫原子
C．肽键&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& D．苯丙氨酸
4．下列4种氨基酸中哪个有碱性侧链？
A．脯氨酸&&&& B．苯丙氨酸&&& C．异亮氨酸&&& D．赖氨酸
5．下列哪种氨基酸属于亚氨基酸？
A．丝氨酸&&&&& B．脯氨酸&&&& C．亮氨酸&&&& D．组氨酸
6．下列哪一项不是蛋白质α-螺旋结构的特点？
A．天然蛋白质多为右手螺旋
B．肽链平面充分伸展
C．每隔3.6个氨基酸螺旋上升一圈。
D．每个氨基酸残基上升高度为0.15nm.
7．下列哪一项不是蛋白质的性质之一？
A．处于等电状态时溶解度最小&&& B．加入少量中性盐溶解度增加
C．变性蛋白质的溶解度增加&&&&& D．有紫外吸收特性
8．下列氨基酸中哪一种不具有旋光性？
A．Leu&&&&& B．Ala&&&&& C．Gly&&&&& D．Ser&&&&& E．Val
9．在下列检测蛋白质的方法中，哪一种取决于完整的肽链？
A．凯氏定氮法&&& B．双缩脲反应&&& C．紫外吸收法&&& D．茚三酮法
10．下列哪种酶作用于由碱性氨基酸的羧基形成的肽键？
A．糜蛋白酶&&&& B．羧肽酶&&&& C．氨肽酶&&&&& D．胰蛋白酶
11．下列有关蛋白质的叙述哪项是正确的？
A．蛋白质分子的净电荷为零时的pH值是它的等电点
B．大多数蛋白质在含有中性盐的溶液中会沉淀析出
C．由于蛋白质在等电点时溶解度最大，所以沉淀蛋白质时应远离等电点
D．以上各项均不正确
12．下列关于蛋白质结构的叙述，哪一项是错误的？
A．氨基酸的疏水侧链很少埋在分子的中心部位
B．电荷的氨基酸侧链常在分子的外侧，面向水相
C．蛋白质的一级结构在决定高级结构方面是重要因素之一
D．蛋白质的空间结构主要靠次级键维持
13．列哪些因素妨碍蛋白质形成α-螺旋结构？
A．脯氨酸的存在&&&&&&&&&&&&&&& B．氨基酸残基的大的支链
C．酸性氨基酸的相邻存在&&&&&&&&& D．碱性氨基酸的相邻存在
E．以上各项都是
14．于β-折叠片的叙述，下列哪项是错误的？
A．β-折叠片的肽链处于曲折的伸展状态
B．它的结构是借助于链内氢键稳定的
C．有的β-折叠片结构都是通过几段肽链平行排列而形成的
D．氨基酸之间的轴距为0.35nm
15．持蛋白质二级结构稳定的主要作用力是：
A．盐键&&&&&& B．疏水键 &&&&&&C．氢键&&&&&& D．二硫键
16．维持蛋白质三级结构稳定的因素是：
A．肽键&&& B．二硫键&&& C．离子键&&& D．氢键&&& E．次级键
17．凝胶过滤法分离蛋白质时，从层析柱上先被洗脱下来的是：
A．分子量大的&&&&&&&&&&&& B．分子量小的
C．电荷多的&&&&&&&&&&&&&& D．带电荷少的
18. 下列哪项与蛋白质的变性无关？
A. 肽键断裂&&&&&&&&&&&&&& B．氢键被破坏
C．离子键被破坏&&&&&&&&&& D．疏水键被破坏
19．蛋白质空间构象的特征主要取决于下列哪一项？
A．多肽链中氨基酸的排列顺序&&&&&&& B．次级键
C．链内及链间的二硫键&&&&&&&&&&&&& D．温度及pH
20．下列哪个性质是氨基酸和蛋白质所共有的？
A．胶体性质&&&&&&&&&&&&&& B．两性性质
C．沉淀反应&&&&&&&&&&&&&& D．变性性质
E．双缩脲反应
21．氨基酸在等电点时具有的特点是：
A．不带正电荷&&&&&&&&&&&& B．不带负电荷
C．A和B&&&&&&&&&&&&&&&& D．溶解度最大
E．在电场中不泳动
22．蛋白质的一级结构是指：
A．蛋白质氨基酸的种类和数目&&&&&&& B．蛋白质中氨基酸的排列顺序
C．蛋白质分子中多肽链的折叠和盘绕& D．包括A,B和C
1.下列氨基酸中，哪个含有吲哚环？（ ）
（A）甲硫氨酸 （B）苏氨酸 （C）色氨酸 （D）缬氨酸 （E）组氨酸
2.下列有关氨基酸的叙述，哪个是错误的？（ ）
（A）酪氨酸和苯丙氨本都含有苯环
（B）酪氨酸和丝氨酸都含羟基
（C）亮氨酸和缬氨酸都是非极性氨基酸
（E）组氨酸、色氨酸和脯氨酸都是杂环氨基酸
3.下列氨酸溶液除哪个外都能使偏振光发生旋转？（ ）
（A）丙氨酸 （B）甘氨酸 （C）亮氨酸 （D）丝氨酸 （E）缬氨酸
4.一个谷氨酸溶液，用5ml 1mol/LnaoH来滴定，溶液的pH值从1.0上升到7.0，下列数值中哪一个接近于该溶液中所含谷氨酸的毫摩尔数？（pKa1=2.19,pKa2=4.25,pKa3=9.67）(& )
（A）1.5 （B）3.0 （C）6.0 （D）12.0 （E）18.0
5.测得某一蛋白质样品的氮含量为0.40克，此样品约含蛋白质多少克？(& )
(A) 2.00g，(B) 2.50g，(C) 3.00g，(D)& 6.25g
6.下列含有两个羧基的氨基酸是：(& )
(A)精氨酸 (B)赖氨酸 (C)色氨酸 (D)谷氨酸
7.含有疏水侧链的一组氨基酸是：(& )
(A)色氨酸、精氨酸，(B)苯丙氨酸、异亮氨酸，(C)精氨酸、亮氨酸，(D)蛋氨酸、组氨酸
8.组成蛋白质的基本单位是：(& )
(A) L-alpha-氨基酸，(B) D-alpha-氨基酸，(C) L-beta-氨基酸，(D) L、D-alpha-氨基酸
9.蛋白质分子中的主要化学键是：(& )
(A)肽键，(B)二硫键，(C)盐键，(D)氢键
10.下列氨基酸中除哪种外都是哺乳动物必需氨基酸？（ ）
（A）苯丙氨酸 （B）赖氨酸 （C）酪氨酸
（D）亮氨酸 & （E）甲硫氨酸
11.下列哪一种氨基酸侧链基团的pKa值最接近于生理pH值？(& )
（A）半胱氨酸 （B）谷氨酸 （C）谷氨酰胺
（D）组氨酸 & （E）赖氨酸
12.肽键在下列哪个波长具有最大光吸收？（ ）
(A）215nm （B）260nm （C）280nm （D）340nm （E）以上都不是
13.有一多及经酸水解后产生等摩尔的Lys、Gly和Ala。如用胰蛋白酶水解该肽，仅发现有游离的Gly和一种二肽。下列多肽的一级结构中，哪一个符合该肽的结构？（ ）
(A)Gly－Lys－Ala－Gly－Ala （B）Ala－Lys－Gly (C)Lys－Gly－Ala
(D) Gly－Lys－Ala (E) Ala－Gly－Lys
14.下列关于肽Glu-His-Arg-Val-Asp的叙述，哪个是错的？（ ）
（A）在pH值12时，在电场中向阳极移动
（B）在pH值12时，在电场中向阳极移动
（C）在pH值12时，在电场中向阳极移动
（D）在pH值12时，在电场中向阳极移动
（E）该多肽的等 电点大约在pH8
15.关于肽键特点叙述错误的是：(& )
(A)肽键的C-N键具有部分双键性质，(B)与alpha-碳原子相连的N和C所形成的化学键可以自由旋转，(C)肽键可以自由旋转，(D)肽键中C-N键所相连的四个原子基本处于同一个平面上
16.维持蛋白质二级结构的主要化学键是：(& )
(A)疏水键，(B)肽键，(C)氢键，(D)二硫键
17.蛋白质分子中的beta-转角存在于蛋白质的几级结构中？(& )
(A)一级结构，(B)二级结构，(C)三级结构，(D)侧链构象
18.关于蛋白质三级结构的描述，其中错误的是：(& )
(A)天然蛋白质均有这种结构，(B)具有三级结构的多肽链都具有生物学活性，(C)三级结构的稳定性主要是由次级键维系，(D)决定盘曲折叠的因素是氨基酸残基
19.典型的α螺旋是（ ）
(A)2.610&& (B)310&& (C)3.613&& (D)4.015&& (E)4.416
20.下列有关α螺旋的叙述哪个是错误的？（ ）
（A）分子内的氢键使α螺旋稳定
（B）减弱R基团间不利的相互作用使α螺旋稳定
（C）疏水作用使α螺旋稳定
（D）在某些蛋白质中，α螺旋是二级结构中的一种类型
（E）脯氨酸和甘氨酸残基使α螺旋中断
21.具有四级结构的蛋白质特征是：(& )
(A)分子中必定含有辅基；(B)在两条或两条以上具有三级结构的多肽链的基础上,肽链进一步折叠，盘曲形成；(C)每条肽链具有独立的生物学活性；(D)有两条或两条以上具有三级结构的多肽链组成
22.关于蛋白质四级结构正确的是：(& )
(A)一定有多个不同的亚基；(B)一定有多个相同的亚基；(C)一定有种类相同，而数目不同的亚基，或者种类不同，而数目相同的亚基；(D)亚基的种类和数目都不定
23.蛋白质的一级结构及高级结构决定于：(& )
(A)分子中的氢键，(B)分子中盐键，(C)氨基酸组成和顺序，(D)分子内部疏水键
24.生理状态下，血红蛋白与氧可逆结合的铁离子处于（ ）
（A）还原性的二价状态
（B）氧化性的三价状态
（C）与氧结合时是三价，去氧后成二价
（D）与氧结合时是二价，去氧后成三价
（E）以上说法都不对
25.蛋白质所形成的胶体颗粒，在下列那种条件下不稳定：(& )
(A)溶液pH值大于pI，(B)溶液pH值等于pI，(C)溶液pH值小于pI，(D)在水溶液中
26.蛋白质的等电点是：(& )
(A)蛋白质的溶液的pH值等于7时溶液的pH值，(B)蛋白质分子呈正离子状态时溶液的pH值，(C)蛋白质分子呈负离子状态时溶液的pH值，(D)蛋白质的正电荷与负电荷相等时溶液的pH值
27.血清白蛋白（pI=4.7）在下列那种pH值溶液中带正电荷？(& )
(A) pH4.0，(B) pH4.7，(C) pH5.0，(D) pH8.0
28.蛋白质溶液稳定因素是：(& )
(A)蛋白质溶液有分子扩散现象，蛋白质在溶液中有“布朗运动”，(B)蛋白质分子表面带有水化膜和同种电荷，(C)蛋白质分子带有电荷
29.蛋白质变性是由于：(& )
(A)氨基酸排列顺序的改变，(B)肽键的断裂，(C)蛋白质空间构象的破坏，(D)蛋白质的水解
30.变性蛋白质的主要特点是：(& )
(A)黏度下降，(B)溶解度增加，(C)生物学活性丧失，(D)容易被盐析出现沉淀
31.下列那种因素不能使蛋白质变性：(& )
(A)加热震荡，(B)强酸强碱、有机溶剂，(C)重金属盐，(D)盐析
32.蛋白质变性不包括：(& )
(A)氢键断裂，(B)肽键断裂，(C)疏水键断裂，(D)二硫键断裂
33.若用重金属沉淀pI=8的蛋白质时，该溶液的pH值应为：(& )
(A) 8，(B) &8，(C) &8，(D) &=8
34.分离纯化下述活性肽：焦谷－组－色－丝－酪－甘－亮－精－脯－甘酰胺的有效方法之一为（ ）
（A）羧甲基（CM－）纤维素层析
（B）二乙氨基乙基（DEAE－）纤维素层析
（C）葡聚糖G－100凝胶过滤
（D）酸性酒精沉淀
（E）硫酸铵沉淀
35.SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量是根据各种蛋白质（ ）
（A）在一定pH值条件下所带净电荷不同
（B）分子大小不同
（C）分子极性不同
（D）溶解度不同
（E）以上说法都不对
36.用某些酸类（苦味酸、钨酸、鞣酸等）沉淀蛋白质的原理是：(& )
(A)破坏盐键，(B)中和电荷，(C)与蛋白质结合成不溶性盐类，(D)调节等电点
37 盐析法沉淀蛋白质的原理是：(& )
(A)中和电荷、破坏水化膜，(B)与蛋白质结合成不溶性蛋白盐，(C)调节蛋白质溶液的等电点，(D)使蛋白质溶液成为pI
38.蛋白质一级结构与功能关系的特点是（ ）
（A）相同氨基酸组成的蛋白质，功能一定相同
（B）一级结构相近的蛋白质，其功能类似性越大
（C）不同结构中任何氨基酸的改变，其生物活性即消失
（D）不同生物来源的同种蛋白质，其一级结构相同
（E）以上都不对
39 蛋白质分子组成中不含有下列那种氨基酸？(& )
(A)半胱氨酸，(B)蛋氨酸，(C)胱氨酸，(D)瓜氨酸
40.下列氨基酸分子含有两个不对称碳原子的氨基酸是（ ）
（A）Pro&& (B)Tyr&& (C)Ser&& (D)Arg&& (E)Thr
41.维持蛋白质三级结构主要靠（ ）
（A）氢键 （B）离子键 （C）疏水作用 （D）范德华力 （E）二硫键
42 蛋白质的一级结构指下面的哪一种情况？(& )
(A)氨基酸种类和数量，(B)分子中的各种化学键，(C)氨基酸残基的排列顺序，(D)分子中的共价键
43.将抗体固定在层极柱的载体上，使抗原从流经此柱蛋白质样品中分离出来，这技术心属于（ ）
(A)吸附层析& （B）离子交换层析& （C）分配层析& （D）亲和层析& （E）凝胶过滤
44.一个蛋白质的相对分子质量为70000，由两条α螺旋肽链构成，其分子长度为（ ）
（A）50nm&& （B）100nm&& （C）47.7nm&& （D）95.4nm&& （E）36.5nm
45.若用电泳分离Gly-Lys、Asp-Val和Ala-His三种二肽，在下列哪个pH值条件下电泳最为合适？（ ）
（A）pH2以下 （B）pH2－4 （C）pH7－9 （D）pH10－12 （E）pH12以上
46.下列氨基酸除_____外都是极性氨基酸
（A）Leu& （B）Thr& （C）Asn& （D）Ser
47.行进疏水吸附层析时，以下哪种条件比较合理（ ）
（A）在有机溶液剂存在量上柱，低盐溶液洗脱
（B）在有机溶液剂存在量上柱，高盐溶液洗脱
（C）低盐条件下上柱，记盐溶液洗脱
（D）高盐溶液上柱，按低盐，水和有机溶剂顺序洗脱
（E）低盐缓冲上柱，低盐洗脱
48.对一个富含His残基的蛋白质，在使用离子交换层析时应优先考虑（ ）
（A）严格控制蛋白质上样液的浓度
（B）严格控制盐浓度
（C）严格控制NaCl梯度
（D）严格控制洗脱液的pH值
（E）严格控制蛋洗脱液的积极
49.下列有关β折叠的叙述哪个是错误的？（ ）
（A）球状蛋白质中无β折叠的结构
（B）β折叠靠链间氢键而稳定
（C）它的氢键是肽链的C＝O与N=H间形成的
（D）α角蛋白可以通过加热处理而转变成β折叠的结构
（E）β折叠有平行的β折叠和反平行的β折叠
50.组成蛋白质的20种氨基酸中,PI值最低和最高的一组是: (& )
（A）Gln和His&&& （B）.Gln和Arg&&&& （C）Asp和 Arg&&& （D）Asp和His
51.下列含有两个羧基的氨基酸是: (& )
（A）.Gly&& （B）Pro&& （C）Trp&& （D）Asp
52.维持蛋白质二级结构稳定的主要因素是: (& )
（A）静电作用& （B）氢键&&& （C）疏水键&&& （D）范德华作用力
53.SDS―凝胶电泳测定蛋白质的分子量是根据各种蛋白质(& )
（A）分子所带电荷不同&&& （B）分子量大小不同&
（C）分子极性不同&&&&&&& （D）电荷和分子大小两种因素
54.通过凯氏微量定氮测得某样品的总蛋白氮为2.0克,该样品含多少克蛋白质？(& )
（A）28.14&& （B）18.56&& （C） 14.07&&& （D）12.5
55.蛋白质中在入２８０ｎｍ处吸光值最大的结构成分是：(& )
（A）色氨酸的吲哚环&&&& （B）酪氨酸的酚环&&&
（C）苯丙氨酸的苯环&&&&& （D）脯氨酸的四氢吡咯环
56.蛋白质的下列氨基酸残基之间存在疏水作用的是：(& )
（A）Glu、Arg&& （B）.Phe、Trp&&& （C） Asp、Leu&&& （D）Ser、Ala
57.下列变化不是蛋白质变性后产生的是：(& )
（A）分子量变小&&&& （B）疏水作用破环& （C）.亚基解聚&&&& （D）生物学性质丧失
58.蛋白质中可与糖形成糖苷酸的氨基酸是：(& )
（A）精氨酸&& （B）丝氨酸&&& （C）赖氨酸&&&& （D）酪氨酸
59.蛋白质分子中α―helix的特点之一是：(& )
（A）肽平面充分伸展&&& （B）靠疏水键维持稳定&
（C）多为左手螺旋& （D）每个氨基酸残基上升高 度为1.5A
60.当蛋白质处于等电点时,可使蛋白质分子的：(& )
（A）稳定性增加&&& （B）表面净电荷不变& （C）表面净电荷增加&&& （D）溶解度最小
61.蛋白质经碱水解导致破坏的氨基酸是：(& )
（A）His,Asp ,Glu&&& （B）Trp,Asn&&& （C） Tyr,Arg,His&&& （D）Cys,Thr,Ser
62.蛋白质变形是由于：(& )
&（A）肽键断裂&&& （B）空间构象破坏& （C辅基脱落& &（D）分子水化层破坏
63.用0.1mol HaoH滴定10mol0.1mol的亮氨酸Hcl溶液，当滴定到达该氨基酸的pl值时，0.1mol NaoH的用量为：(& )
（A）10ml&&&&& （B）100ml&&&& （C）50ml&&& （D）500ml
64.氨基酸与茚三酮反应是属于：(& )
（A）脱氢反应&&& （B）酶催化反应&&&& （C）氧化脱羧脱氨反应&&&&& （D）氨基酸还原反应
1.下列属于极性氨基酸的有：(& )
&（A）Cys&& (B)His&&&& （C）Met&&&& (D).Lys
2.用于蛋白质肽链N端分析的方法有：(& )
（A）Edmain法 (B)Sanger法 . （C）Dansyl氯法 (D)氨肽酶法
3.下列关于还原型谷胱甘肽结构性质的叙述正确的是：(& )
（A）谷胱甘肽分子中含有一个流基&&&&&&&& (B)谷胱甘肽是含有两条肽链的肽
（C）谷胱甘肽中的“胱”是代表半胱氨酸&& (D)谷氨酸的γ―羧基参与了肽键的形成
4.下列关于变性的蛋白质结构、性质的叙述正确的是：(& )
（A）变性后的蛋白质肽键断裂&&&&& (B)变性后的蛋白质形状发生改变&&&
（C）变性后的蛋白质容易被酶水解&& (D)变性后的蛋白质溶解度降低
5.下列关于α--螺旋叙述正确的是：(& )
（A）通过疏水性相互作用使α―螺旋稳定&&&&&
(B)Gly和pro具有阻止α－螺旋结构的倾向&&&&
（C）氨基酸残基之间的－C与NH形成的氨键使α螺旋稳定&&&&&&&
(D)在某些蛋白质中,α-螺旋是二级结构中的一种类型
6.含硫氨基酸包括：& (& )
(A)蛋氨酸，(B)苏氨酸，(C)组氨酸，(D)半胱氨酸，(E) 丝氨酸
7.下列关于氨基酸的说明正确的是：(& )
（A）Try与Phe含有苯核&&&&&&&&&&&& (B)Tyr与Ser都含有羟基&&&&
(C)Glu和Asp都含有二个羧基&&&&&&& (D)Lys 和Arg都是碱性氨基酸
8.下列哪些是碱性氨基酸：(& )
(A)组氨酸，(B)蛋氨酸，(C)精氨酸，(D)赖氨酸，(E)甘氨酸
9.蛋白质特异的生物学功能主要有：
(A)是各种组织的基本组成成分，(B)催化功能，(C)收缩及运动功能，(D)免疫功能，(E)调节功能
10.组成蛋白质的基本元素主要有：(& )
(A)碳，(B)氧，(C)氮，(D)磷，(E)氢
11.下列关于蛋白质叙述正确的是：(& )
(A).具Folin-酚反应&&&&&&&&&&&&&&&&& (B).氨基酸组成相同的蛋白质具相同的构象&&&
(C)肽键中的C―N键可以自由旋转&&& (D).系数6.25是凯氏定氮法的计算基础
12.下列关于肽键的叙述正确的是：(& )
(A)具有部分双键的性质&&&&&&&&&&&&&&&&& (B)比一般C―N单键短&&&
(C)构成肽键的原子处于一个平面上&&&&&&& (D).肽键可以自由旋转
13.蛋白质在电场中的泳动方向取决于(& )
(A)蛋白质的分子量&&&&&&&&&&&&&&&& (B)蛋白质分子所带电荷&&&&&
(C)蛋白质所在溶液的温度&&&&&&&&&& (D).蛋白质所在溶液的PH
14.关于组成蛋白质的氨基酸结构，正确的说法是：(& )
(A)在alpha-碳原子上都结合有氨基或亚氨基，(B)所有的alpha-碳原子都是不对称碳原子，(C)组成人体的氨基酸除一种外都是L型，(D)脯氨酸是唯一的一种亚氨基酸，(E)不同氨基酸的R基团大部分都是相同的
15.芳香族氨基酸是：(& )
(A)苯丙氨酸，(B)酪氨酸，(C)色氨酸，(D)脯氨酸，(E)组氨酸
16.关于肽键与肽的下列描述，哪些是正确的：(& )
(A)肽键具有部分双键性质，(B)是核酸分子中的基本结构键，(C)含两个肽键的肽称三肽，(D)肽链水解下来的氨基酸称氨基酸残基，(E)蛋白质的肽链也叫寡肽
17.下列具有四级结构的蛋白质有：(& )
(A)血红蛋白，(B)肌红蛋白，(C)清蛋白，(D)乳酸脱氢酶，(E)免疫球蛋白
18.下列氨基酸中哪些具有分支的碳氢侧链？（ ）
(A)缬氨酸 (B)组氨酸 (C)异亮氨酸 (D)色氨酸
19.在生理pH值情况下，下列氨基酸中的哪些带负电荷？（ ）
(A)半胱氨酸 (B)天冬氨酸 (C)赖氨酸 (D)谷氨酸
20.下列有关Phe-Leu-Ala-Val-Phe-Leu-Lys的叙述哪些是正确的？（ ）
(A)是一个六肽 (B)是一个碱性多肽
(C)对脂质表面无亲和力 (D)等电点大于8
21.下列关于蛋白质结构的叙述哪些是正确的？（ ）
(A)二硫键对稳定蛋白质的构象起重要作用
(B)当蛋白质放入水中时，带电荷的氨基酸侧链趋向于排列在分子的外面
(C)蛋白质的一级结构决定高级结构
(D)氨塞酸的疏水侧链很少埋在蛋白质分子的内部
22.镰刀形红细胞贫血病患者血红蛋白β-链上第六位的谷氨酸被缬酸取代后，将产生哪些变化？（ ）
(A)在pH7.0电泳时，增加了异常血红蛋白向阳极移动的速度
(B)导致异常脱氧血红蛋白的聚合作用
(C)增加了导演血红蛋白的溶解度
(D)一级结构发生改变
23.下列有关血红蛋白运输氧的叙述哪些是正确的？（ ）
(A)四个血红素基各自独立地与氧结合，彼此之间并无联系
(B)以血红蛋白结合氧的百分数对氧分压作图，曲线呈S形
(C)氧与血红蛋白的结合能力比一氧化碳强
(D)氧与血红蛋白的结合并不引起血红蛋白与氧亲和力的下降？（ ）
24.打开蛋白质分子中的二硫键（ ）
(A)可用8mol/L尿素处理 (B)用HCOOOH处理
(C)用水解的方法 (D)用HSCH2CH2OH处理
25.关于蛋白质的二级结构，正确的说法是：(& )
(A)一种蛋白质分子只存在一种二级结构类型，(B)是多肽链本身折叠盘曲而形成，(C)主要为alpha-螺旋和beta-折叠结构，(D)维持二级结构稳定的键是肽键，(E)二级结构类型及含量多少由多肽链氨基酸组成决定的
26.关于alpha-螺旋正确的是：(& )
(A)螺旋中每3.6个氨基酸残基为一周，(B)为右手螺旋，(C)两螺旋之间借二硫键维持其稳定，(D)氨基酸侧链R基团分布在螺旋外侧，(E)酸性氨基酸集中区域有利于螺旋的形成
27.蛋白质的二级结构包括：(& )
(A) alpha-螺旋，(B) beta-折叠(片层)，(C) beta-转角，(D)无规卷曲，(E)双螺旋结构
28.下列哪种因素影响alpha-螺旋的形成: (& )
(A) R基团的大小，(B) R基团的形状，(C) R基团所带电荷性质，(D)螺旋的旋转方向，(E)带同种电荷的R基团集中区
29.下列关于beta-片层结构的论述哪些是正确的: (& )
(A)是一种伸展的肽链结构，(B)肽键平面折叠成锯齿状，(C)也可由两条以上多肽链顺向或逆向平行排列而成，(D)两链之间形成离子键以使结构稳定，(E)肽链中氨基酸侧链R基团伸向锯齿上侧
30.维持蛋白质三级结构的主要键是: (& )
(A)肽键，(B)疏水键，(C)离子键，(D)范德华引力，(E)酯键
31.肽键平面中能够旋转的键有: (& )
(A) C=O双键，(B) C-N单键，(C) N-H单键，(D) C(alpha)-N单键，(E) C(alpha)-C单键
32.血红蛋白的结构规律及特点: (& )
(A)为一种单纯蛋白质，(B)具有两个alpha亚基,两个beta亚基，(C)每一亚基具有独立的三级结构，(D)亚基之间借次级键连接，(E)整个分子呈球形
33.蛋白质高分子溶液的特性: (& )
(A)黏度大；(B)分子量大,分子对称；(C)不能透过半透膜；(D)扩散速度快；(E)有布朗运动
34.下列alpha-氨基酸对应的alpha-酮酸是三羧酸循环中间体的有: (& )
(A)丙氨酸，(B)甘氨酸，(C)天冬氨酸，(D)谷氨酸，(E)色氨酸
35.可作为结合蛋白质辅基的有: (& )
(A)核苷酸，(B)金属离子，(C)糖类，(D)激素，(E)维生素B12衍生物
36.下列哪种蛋白质在pH=5的溶液中带正电荷? (& )
(A) pI=4.5的蛋白质，(B) pI=7.4的蛋白质，(C) pI=7的蛋白质，(D) pI=6.5的蛋白质，(E) pI=3.5的蛋白质
37.使蛋白质沉淀但不变性的方法有：(& )
(A)中性盐沉淀蛋白，(B)鞣酸沉淀蛋白，(C)低温乙醇沉淀蛋白，(D)重金属盐沉淀蛋白，(E)常温乙醇沉淀蛋白
38.蛋白质变性后: (& )
(A)肽键断裂，(B)一级结构改变，(C)空间结构改变，(D)分子内亲水基团暴露，(E)生物学活性改变
39.可测定蛋白质分子量的方法有: (& )
(A)茚三酮反应，(B)电泳法，(C)超速离心法，(D)双缩脲反应，(E)酚试剂反应
40.蛋白质沉淀、变性和凝固的关系，下面叙述正确的是：(& )
(A)蛋白质沉淀后必然变性；(B)蛋白质凝固后一定会变性；(C)变性蛋白一定要凝固；(D)变性蛋白不一定会沉淀；(E)变性就是沉淀，沉淀就是变性
41.变性蛋白质的特性有：(& )
(A)溶解度显著下降，(B)生物学活性丧失，(C)易被蛋白酶水解，(D)凝固和沉淀，(E)表面电荷被中和
42.蛋白质胶体溶液的稳定因素是：(& )
(A)蛋白质颗粒在溶液中进行布朗运动，促使扩散；(B)蛋白质分子表面有水化膜；(C)蛋白质溶液粘度大；(D)蛋白质分子带有同性电荷；(E)低温
(四) 是非判断题
1．& 氨基酸与茚三酮反应都产生蓝紫色化合物。(& )
2．& 因为羧基碳和亚氨基氮之间的部分双键性质，所以肽键不能自由旋转。(& )
3．& 所有的蛋白质都有酶活性。(& )
4．& α-碳和羧基碳之间的键不能自由旋转。(& )
5．& 多数氨基酸有D-和L-两种不同构型，而构型的改变涉及共价键的破裂。
6．& 所有氨基酸都具有旋光性。(& )
7．& 构成蛋白质的20种氨基酸都是必需氨基酸。(& )
8．& 蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序在很大程度上决定了它的构象。(& )
9．& 一氨基一羧基氨基酸的pI为中性，因为-COOH和-NH2 的解离度相同。(& )
10．&&&&&&&&&&&&& 蛋白质的变性是蛋白质立体结构的破坏，因此涉及肽键的断裂。(& )
11．&&&&&&&&&&&&& 蛋白质是生物大分子，但并不都具有四级结构。(& )
12．&&&&&&&&&&&&& 血红蛋白和肌红蛋白都是氧的载体，前者是一个典型的变构蛋白，在与氧结合过程中呈现变构效应，而后者却不是。(& )
13．&&&&&&&&&&&&& 用FDNB法和Edman降解法测定蛋白质多肽链N-端氨基酸的原理是相同的。
14．&&&&&&&&&&&&& 并非所有构成蛋白质的20种氨基酸的α-碳原子上都有一个自由羧基和一个自由氨基。(& )
15．&&&&&&&&&&&&& 蛋白质是两性电解质，它的酸碱性质主要取决于肽链上可解离的R基团。(& )
16．&&&&&&&&&&&&& 在具有四级结构的蛋白质分子中，每个具有三级结构的多肽链是一个亚基。(& )
17．&&&&&&&&&&&&& 所有的肽和蛋白质都能和硫酸铜的碱性溶液发生双缩尿反应。(& )
18．&&&&&&&&&&&&& 一个蛋白质分子中有两个半胱氨酸存在时，它们之间可以形成两个二硫键。(& )
19．&&&&&&&&&&&&& 盐析法可使蛋白质沉淀，但不引起变性，所以盐析法常用于蛋白质的分离制备。(& )
20．&&&&&&&&&&&&& 蛋白质的空间结构就是它的三级结构。(& )
21．&&&&&&&&&&&&& 维持蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键。(& )
22．&&&&&&&&&&&&& 具有四级结构的蛋白质，它的每个亚基单独存在时仍能保存蛋白质原有的生物活性。(& )
23．&&&&&&&&&&&&& 变性蛋白质的溶解度降低，是由于中和了蛋白质分子表面的电荷及破 坏了外层的水膜所引起的。(& )
24．&&&&&&&&&&&&& 蛋白质二级结构的稳定性是靠链内氢键维持的，肽链上每个肽键都参与氢键的形成。(& )
25．&&&&&&&&&&&&& 构成蛋白质的20种基本氨基酸除脯氨酸外，在结构上的共同点是与羧基相邻α-碳原子上都有一个氨基。(& )
26．&&&&&&&&&&&&& 一个氨基酸在水溶液中或固体状态时是以两性离子形式存在。(& )
27．&&&&&&&&&&&&& 一氨基一羧基氨基酸的pH为中性，因为---COOH和NH3解离程度相等。(&& )
28．&&&&&&&&&&&&& 构型的改变必须有旧共价键的破坏和新共价键的形成，而构象的改变则不发生此变化。(&& )
29．&&&&&&&&&&&&& 组成蛋白质的氨基酸与茚三酮反应都呈兰紫色。(&& )
30．&&&&&&&&&&&&& 肽的命名是从肽链的游离氨基开始的。(&& )
31．&&&&&&&&&&&&& 蛋白质分子中肽链能自由旋转。(& )
32．&&&&&&&&&&&&& 蛋白质中主链骨架由NGGNGGNGG…………等组成。.(&& )
33．&&&&&&&&&&&&& 所有的蛋白质都具有一、二、三、四级结构。.(& )
34．&&&&&&&&&&&&& 蛋白质在pl时其溶解度最小。(& )
35．&&&&&&&&&&&&& pH2.3时，所有氨基酸都带正电荷。.(& )
36．&&&&&&&&&&&&& SDS―PAGE中,肽链越长，结合的SDS分子越多，故泳动速度越快。(& )
37．&&&&&&&&&&&&& 该氨基酸溶液的pH大于它的pI时,则该氨基酸在电场中向正极移动。(& )
38．&&&&&&&&&&&&& 蛋白质分子的四级结构是指多个肽键通过共价键连成的整体分子。(& )
39．&&&&&&&&&&&&& 血红蛋白与肌红蛋白均为氧的载体，前者是一个典型的变构蛋白，后者则不是。.(&& )
40．&&&&&&&&&&&&& 变性的蛋白质的分子量发生了变化。(& )
41．&&&&&&&&&&&&& 纸电泳分离氨基酸是根据它们的解离性质。(& )
42．&&&&&&&&&&&&& CNBr能裂解Gly-Met-Pro三肽。(& )
43．&&&&&&&&&&&&& 双缩脲反应是多肽和蛋白质特有的反应，所以二肽也有双缩脲反应。（& ）
44．&&&&&&&&&&&&& 维持蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键。(& )
45．&&&&&&&&&&&&& 大多数蛋白质的主要带电基团是由它N端的氨基和C端的羧基给成。(& )
46．&&&&&&&&&&&&& 蛋白质的亚基（或称亚单位）和肽键是同义的。(& )
47．&&&&&&&&&&&&& SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测蛋白质分子量是依据不同蛋白质所带电菏的不同而分离的。(& )
48．&&&&&&&&&&&&& 用凝胶过滤（Sephade×G100）柱层析分离蛋白质时,总是分子量小的先下来，分子量大的后下来。(& )
49．&&&&&&&&&&&&& 蛋白质变性作用的实质就是蛋白质分子中所有的键均被破坏引起天然构象的解体。(& )
50．&&&&&&&&&&&&& 浓NaCl易破坏离子键，浓尿素易破坏氢键。(& )
51．&&&&&&&&&&&&& 当溶液的pH值大于某一可解离基团的pKa值时，该基团有一半以上被解离。(& )
52．&&&&&&&&&&&&& 一个化全物如能和茚三酮反应生成紫色，说明这化全物是氨基酸、肽或蛋白质。(& )
53．&&&&&&&&&&&&& 一个蛋白质样品经酸水解后，能用氨基酸自动分析仪准确测定它的所有氨基酸。(& )
54．&&&&&&&&&&&&& 用纸电泳法分离氨基酸主要是根据氨基酸的极性不同。(& )
55．&&&&&&&&&&&&& 组氨酸是人体的一种半必需氨基酸。(& )
56．&&&&&&&&&&&&& 在水溶液中，蛋白质溶解度最小时的pH值通常就是它的等电点。(& )
57．&&&&&&&&&&&&& 变性蛋白质溶解度降低是因为蛋白质分子的电荷被中和以及除去了蛋白质外面的水化层所引起的。(& )
58．&&&&&&&&&&&&& 血红蛋白的α-键、&-键和肌红蛋白的肽键在三级结构上很相似，所以它们都有氧的能力。血红蛋与氧的亲和力较肌红蛋白更强。(& )
59．&&&&&&&&&&&&& 血红蛋白与肌红蛋白均为氧载体，前者是一个典型的别构（或变构）蛋白，因而与氧结合过程中呈现协同效应，而后者却不是。(& )
60．&&&&&&&&&&&&& 测定别构酶的相对分子质量可以用十二烷基硫酸钠（SDS）－聚丙烯酰胺凝胶电泳。
61．&&&&&&&&&&&&& .某蛋白质在pH6时向阳极移动，则其等电点小于6。(& )
62．&&&&&&&&&&&&& 构成蛋白质的所有氨基酸都是L-形氨基酸。因为构成蛋白质的所有氨基酸都有旋性。(& )
63．&&&&&&&&&&&&& 一条肽链在回折转弯时，转弯处的氨基酸常常是脯氨酸或甘氨酸。(& )
64．&&&&&&&&&&&&& 如果用SephadexG-100来分离细胞色素C、血红蛋白、谷氨酸和谷胱甘肽，则洗脱顺序为：谷氨酸－谷胱甘肽－细胞色素C－血红蛋白。(& )
65．&&&&&&&&&&&&& α-螺旋中每个肽键的酰胺氢都参与氢键形成。(& )
66．&&&&&&&&&&&&& 蛋白质的等电点是可以改变的，但等离子点不能改变。(& )
67．&&&&&&&&&&&&& 天然氨基酸都具有一个不对称a-碳原子。(& )
68．&&&&&&&&&&&&& 亮氨酸的疏水性比丙氨酸强。(& )
69．&&&&&&&&&&&&& 蛋白质分子中所有氨基酸（除甘氨酸外）都是左旋的。(& )
70．&&&&&&&&&&&&& 自然界的蛋白质和多肽类物质均由L-型氨基酸组成。(& )
71．&&&&&&&&&&&&& 只有在很高或很低pH值时，氨基酸才主要以非离子化形式存在。(& )
（五）问答题
1．& 什么是蛋白质的一级结构？为什么说蛋白质的一级结构决定其空间结构？
2．& 什么是蛋白质的空间结构？蛋白质的空间结构与其生物功能有何关系？
3．& 蛋白质的α―螺旋结构有何特点？
4．& 蛋白质的β―折叠结构有何特点？
5．& 举例说明蛋白质的结构与其功能之间的关系。
6．& 什么是蛋白质的变性作用和复性作用？蛋白质变性后哪些性质会发生改变？
7．& 简述蛋白质变性作用的机制。
8．& 蛋白质有哪些重要功能
9．& 蛋白质分离和提纯有哪几个主要步骤?简要说明。
10．&&&&&&&&&&&&& 在蛋白质分子中有哪些重要的化学键?这些键分别在哪雪基团之间产生?
11．&&&&&&&&&&&&& 蛋白质变性后有哪些现象出现?并举出三种以上能引起蛋白质变性的试剂。
12．&&&&&&&&&&&&& 某氨基酸溶于pH7的水中，所得氨基酸溶液的pH值为6，问氨基酸的pI& 是大于6、等于6还是小于6？
13．&&&&&&&&&&&&& 一个Ala、Ser、Phe、Leu、Arg、Asp和His的混合液在pH3.9时进行纸电泳，指出哪些氨基酸向阳极移动？哪些氨基酸向阴极移动？
14．&&&&&&&&&&&&& 用阳离子交换树脂分离下列氨基酸对，用pH7.0的缓冲液洗脱时那种氨基酸先被洗脱下来？
（1）Asp和Lys （2）Arg和Met （3）Glt和Val&& (4)Gly和Leu&&& (5)Ser和Ala
15．&&&&&&&&&&&&& 某一肽经酸水解组成分析为5种氨基酸,该肽的N端非常容易环化.经溴化氰处理后得一游离碱性氨基酸，Pauly反应阳性。若用胰蛋白酶作用则得两个肽段：其一为坂口反应阳性，另一个在280nm有强的光吸收，并呈Millon阳性反应。求此肽的氨基酸序列，并指出它的等点应该是大于、等于或小于7？
16．&&&&&&&&&&&&& 有一球状蛋白质，在pH的水中溶液中能折叠成一定的空间结构。通常非常非极性氨基酸侧链位于分子内部形成疏水核，极性氨基酸侧链位于分子外部形成亲水面。问：（1）Val 、Pro、 Phe、 Asp、 Lle和 His中哪些氨基酸侧链位于分子内部？哪些氨基酸侧链位于分子外部？（2）为什么球状蛋白质分子内部和外部都可发现Gly和Ala？（3）虽然Ser、 thr 、asn和 Gln是极性的，为什么它们位于球状蛋白质的分子内部？（4）在球状蛋白质分子的内部还是外部能找到Cys(半胱氨酸)，为什么？
17．&&&&&&&&&&&&& 扼要解释为什么大多数球状蛋白质在溶液中具有下列性质。（1）在低pH值时沉淀。（2）当离子强度从零逐渐增加时，其溶解度开始增加,然后下降,最后出现沉淀。（3）在一定的离子强度下，达到等电点PH 值时，表现出最小的溶解度。(4)加热时沉淀。(5)加入一种可和水混溶的非极性溶剂减小其介质的电常数，而导致溶解度减小。(6)如果加入一种非极性强的溶剂，使介电常数大大地下降会导致变性。
18．&&&&&&&&&&&&& 向lL1mol／L的处于等电点甘氨酸溶液中加入0.3molHCI，问所得溶液的pH值是多少?如果加入0.3molNaOH以代替HCL时，pH值又是多少?&
19．&&&&&&&&&&&&& 1.068g的某种结晶a-氨基酸，其pk’1；和pk’2值分别为2.4和9.7，溶解于100ml的0.1mol／L NaOH溶液中时，其pH值为10.4。计算该氨基酸的相对分子质量，并写出其可能的分子式。
20．&&&&&&&&&&&&& 已知Lys的ε-氨基的pk’a为10.5，问在pH9.5时，Lys水溶液中将有多少份数这种基团给出质子?
21．&&&&&&&&&&&&& 有一个肽段，经酸水解测定知由4个氨基酸组成。用胰蛋白酶水解成为两个片段，其中一个片段在280nm有强的光吸收，并且对Pauly反应、坂口反应都是阳性；另一个片段用CNBr处理后释放出一个氨基酸与茚三酮反应呈黄色。试写出这个肽的氨基酸排列顺序及其化学结构式。
22．&&&&&&&&&&&&& 一种纯的含钼蛋白质，用1cm的比色杯测定其消光系数ε为1.5。该蛋白质的浓溶液含有10.56ug(Mo)／ml。1:50稀释该浓溶液后A280为0.375。计算该蛋白质的最小相对分子质量(Mo的相对原子质量为95.94)。
23．&&&&&&&&&&&&& 1.0mg某蛋白质样品进行氨基酸分析后得到58.1ug的亮氨酸和36.2ug的色氨酸，计算该蛋白质的最小相对分子质量。
24．&&&&&&&&&&&&& 某一蛋白质分子具有螺旋及尽折叠两种构象，分子总长度为5.5×10-5cm，该蛋白质相对分子质量为250000。试计算该蛋白质分子中a-螺旋及β-折叠两种构象各占多少?(氨基酸残基平均相对分子质量以100计算)。
25．&&&&&&&&&&&&& 根据蛋白质一级氨基酸序列可以预测蛋白质的空间结构。假设有下列氨基酸序列（如图）：
1&&&&&&&&&&& 5&&&&&&&&&&&&&& 10&&&&&&&&&&&&&&& 15
Ile-Ala-His-Thr-Tyr-Gly-Pro-Glu-Ala-Ala-Met-Cys-Lys-Try-Glu-Ala-Gln-
&&&&&& 20&&&&&&&&&&&&&& 25&&&& 27
Pro-Asp-Gly-Met-Glu-Cys-Ala-Phe-His-Arg
（1）预测在该序列的哪一部位可能会出弯或β-转角。
（2）何处可能形成链内二硫键？
（3）假设该序列只是大的球蛋白的一部分，下面氨基酸残基中哪些可能分布在蛋白的外表面，哪些分布在内部？
天冬氨酸；异亮氨酸；苏氨酸；缬氨酸；谷氨酰胺；赖氨酸
11、试比较较Gly、Pro与其它常见氨基酸结构的异同，它们对多肽链二级结构的形成有何影响？
12、为什么说蛋白质水溶液是一种稳定的亲水胶体？
13、聚赖氨酸（poly Lys）在pH7时呈无规则线团，在pH10时则呈α-螺旋；聚谷氨酸（poly Glu）在pH7时呈无规则线团，在pH4时则呈α-螺旋，为什么？14、多肽链片段是在疏水环境中还是在亲水环境中更有利于α-螺旋的形成，为什么？
15、在蛋白质分子中有哪些重要的化学键?这些键分别在哪些基团之间产生?
16、一个Ala、Ser、Phe、Leu、Arg、Asp和His的混合液在pH3.9时进行纸电泳，指出哪些氨基酸向阳极移动？哪些氨基酸向阴极移动？
17、用阳离子交换树脂分离下列氨基酸对，用pH7.0的缓冲液洗脱时那种氨基酸先被洗脱下来？（1）Asp和Lys （2）Arg和Met （3）Glt和Val&& (4)Gly和Leu&&& (5)Ser和Ala
18、扼要解释为什么大多数球状蛋白质在溶液中具有下列性质。（1）在低pH值时沉淀。（2）当离子强度从零逐渐增加时，其溶解度开始增加,然后下降,最后出现沉淀。（3）在一定的离子强度下，达到等电点PH 值时，表现出最小的溶解度。(4)加热时沉淀。(5)加入一种可和水混溶的非极性溶剂减小其介质的电常数，而导致溶解度减小。(6)如果加入一种非极性强的溶剂，使介电常数大大地下降会导致变性。
三、 习题解答
（一）名词解释
1．两性离子：指在同一氨基酸分子上含有等量的正负两种电荷，又称兼性离子或偶极离子。
2．必需氨基酸：指人体（和其它哺乳动物）自身不能合成，机体又必需，需要从饮食中获得的氨基酸。
3. 氨基酸的等电点：指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH值，用符号pI表示。
4．稀有氨基酸：指存在于蛋白质中的20种常见氨基酸以外的其它罕见氨基酸，它们是正常氨基酸的衍生物。
5．非蛋白质氨基酸：指不存在于蛋白质分子中而以游离状态和结合状态存在于生物体的各种组织和细胞的氨基酸。
6．构型：指在立体异构体中不对称碳原子上相连的各原子或取代基团的空间排布。构型的转变伴随着共价键的断裂和重新形成。
7．蛋白质的一级结构：指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序，以及二硫键的位置。
8．构象：指有机分子中，不改变共价键结构，仅单键周围的原子旋转所产生的原子的空间排布。一种构象改变为另一种构象时，不涉及共价键的断裂和重新形成。构象改变不会改变分子的光学活性。&
9．蛋白质的二级结构：指在蛋白质分子中的局部区域内，多肽链沿一定方向盘绕和折叠的方式。
10．结构域：指蛋白质多肽链在二级结构的基础上进一步卷曲折叠成几个相对独立的近似球形的组装体。
11．蛋白质的三级结构：指蛋白质在二级结构的基础上借助各种次级键卷曲折叠成特定的球状分子结构的构象。
12．氢键：指负电性很强的氧原子或氮原子与N-H或O-H的氢原子间的相互吸引力。
13．蛋白质的四级结构：指多亚基蛋白质分子中各个具有三级结构的多肽链以适当方式聚合所呈现的三维结构。
14．离子键：带相反电荷的基团之间的静电引力，也称为静电键或盐键。
15．超二级结构：指蛋白质分子中相邻的二级结构单位组合在一起所形成的有规则的、在空间上能辨认的二级结构组合体。
16．疏水键：非极性分子之间的一种弱的、非共价的相互作用。如蛋白质分子中的疏水侧链避开水相而相互聚集而形成的作用力。
17．范德华力：中性原子之间通过瞬间静电相互作用产生的一种弱的分子间的力。当两个原子之间的距离为它们的范德华半径之和时，范德华力最强。
18．盐析：在蛋白质溶液中加入一定量的高浓度中性盐（如硫酸氨），使蛋白质溶解度降低并沉淀析出的现象称为盐析。
19．盐溶：在蛋白质溶液中加入少量中性盐使蛋白质溶解度增加的现象。
20．蛋白质的变性作用：蛋白质分子的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象。蛋白质在受到光照、热、有机溶剂以及一些变性剂的作用时，次级键遭到破坏导致天然构象的破坏，但其一级结构不发生改变。
21．蛋白质的复性：指在一定条件下，变性的蛋白质分子恢复其原有的天然构象并恢复生物活性的现象。
22．蛋白质的沉淀作用：在外界因素影响下，蛋白质分子失去水化膜或被中和其所带电荷，导致溶解度降低从而使蛋白质变得不稳定而沉淀的现象称为蛋白质的沉淀作用。
23．凝胶电泳：以凝胶为介质，在电场作用下分离蛋白质或核酸等分子的分离纯化技术。
24．层析：按照在移动相（可以是气体或液体）和固定相（可以是液体或固体）之间的分配比例将混合成分分开的技术。
（二）填空题
1．&&& 1．&&& 氨；羧基；&
2．&&& 2．&&& 16 ；6.25&&&
3．&&& 3．&&& 谷氨酸；天冬氨酸；丝氨酸；苏氨酸
4．&&& 4．&&& 苯丙氨酸；酪氨酸；色氨酸；紫外吸收&&&&&&&
5．&&& 5．&&& 负极&
6．&&& 6．&&& 组氨酸；半胱氨酸；蛋氨酸&&&&&&
7．&&& 7．&&& α-螺旋结构；β-折叠结构
8． C=O；N=H；氢；0.54nm； 3.6；0.15nm；右
9． 脯氨酸；羟脯氨酸&&&&
10．极性；疏水性&&&&
11．蓝紫色；脯氨酸
12．肽键；二硫键；氢键；次级键；氢键；离子键；疏水键；范德华力
13．表面的水化膜；同性电荷&&&&&&&
14．谷胱甘肽；巯基
15．增加；盐溶；减小；沉淀析出；盐析；蛋白质分离
16．带电荷量；分子大小；分子形状；方向；速率
17．两性离子；最小
18．FDNB法（2,4-二硝基氟苯法）；Edman降解法（苯异硫氢酸酯法）
19．沉降法；凝胶过滤法；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE法）
20．不动；向正极移动；向负极移动；&&
21．两性离子；负；
23．氢键；
24．C；a；b&&&&
25．16 672； 66 687；&&&&&
26．50圈；27nm
（三）& 选择题
1．D：5种氨基酸中只有赖氨酸为碱性氨基酸，其等电点为9.74,大于生理pH值，所以带正电荷。
2．B：人（或哺乳动物）的必需氨基酸包括赖氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸8种，酪氨酸不是必需氨基酸。
3．A：酪氨酸和苯丙氨酸在280nm处的克分子消光系数分别为540何120,所以酪氨酸比苯丙氨酸有较大吸收，而且大多数蛋白质中都含有酪氨酸。肽键的最大吸收在215nm,半胱氨酸的硫原子在280nm和215nm均无明显吸收。
4．D：在此4种氨基酸中，只有赖氨酸的R基团可接受氢质子，作为碱，而其它3种氨基酸均无可解离的R侧链。
5．B：氨基酸的α-碳上连接的是亚氨基而不是氨基，所以实际上属于一种亚氨基酸，而其它氨基酸的α-碳上都连接有氨基，是氨基酸。
6．B：天然蛋白质的α-螺旋结构的特点是，肽链围绕中心轴旋转形成螺旋结构，而不是充分伸展的结构。另外在每个螺旋中含有3.6个氨基酸残基，螺距为0.54nm,每个氨基酸残基上升高度为0.15nm,所以B不是α-螺旋结构的特点。
7．C：蛋白质处于等电点时，净电荷为零，失去蛋白质分子表面的同性电荷互相排斥的稳定因素，此时溶解度最小；加入少量中性盐可增加蛋白质的溶解度，即盐溶现象；因为蛋白质中含有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸，所以具有紫外吸收特性；变性蛋白质的溶解度减小而不是增加，因为蛋白质变性后，近似于球状的空间构象被破坏，变成松散的结构，原来处于分子内部的疏水性氨基酸侧链暴露于分子表面，减小了与水分子的作用，从而使蛋白质溶解度减小并沉淀。
8．C：甘氨酸的α-碳原子连接的4个原子和基团中有2个是氢原子，所以不是不对称碳原子，没有立体异构体，所以不具有旋光性。
9．B：双缩脲反应是指含有两个或两个以上肽键的化合物（肽及蛋白质）与稀硫酸铜的碱性溶液反应生成紫色（或青紫色）化合物的反应，产生颜色的深浅与蛋白质的含量成正比，所以可用于蛋白质的定量测定。茚三酮反应是氨基酸的游离的α-NH与茚三酮之间的反应；凯氏定氮法是测定蛋白质消化后产生的氨；紫外吸收法是通过测定蛋白质的紫外消光值定量测定蛋白质的方法，因为大多数蛋白质都含有酪氨酸，有些还含有色氨酸或苯丙氨酸，这三种氨基酸具有紫外吸收特性，所以紫外吸收值与蛋白质含量成正比。
10．D：靡蛋白酶即胰凝乳蛋白酶作用于酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸的羧基参与形成的肽键；羧肽酶是从肽链的羧基端开始水解肽键的外肽酶；氨肽酶是从肽链的氨基端开始水解肽键的外肽酶；胰蛋白酶可以专一地水解碱性氨基酸的羧基参与形成的肽键。
11．A：蛋白质的等电点是指蛋白质分子内的正电荷桌能总数与负电荷总数相等时的pH值。蛋白质盐析的条件是加入足量的中性盐，如果加入少量中性盐不但不会使蛋白质沉淀析出反而会增加其溶解度，即盐溶。在等电点时，蛋白质的净电荷为零，分子间的净电斥力最小，所以溶解度最小，在溶液中易于沉淀，所以通常沉淀蛋白质应调pH至等电点。
12．A：在蛋白质的空间结构中，通常是疏水性氨基酸的侧链存在于分子的内部，因为疏水性基团避开水相而聚集在一起，而亲水侧链分布在分子的表面以充分地与水作用；蛋白质的一级结构是多肽链中氨基酸的排列顺序，此顺序即决定了肽链形成二级结构的类型以及更高层次的结构；维持蛋白质空间结构的作用力主要是次级键。
13．E：脯氨酸是亚氨基酸,参与形成肽键后不能再与C=O 氧形成氢键，因此不能形成α-螺旋结构;氨基酸残基的支链大时，空间位阻大，妨碍螺旋结构的形成；连续出现多个酸性氨基酸或碱性氨基酸时，同性电荷会互相排斥，所以不能形成稳定的螺旋结构。
14．C：β-折叠结构是一种常见的蛋白质二级结构的类型，分为平行和反平行两种排列方式，所以题中C项的说法是错误的。在β-折叠结构中肽链处于曲折的伸展状态，氨基酸残基之间的轴心距离为0.35n, m, 相邻肽链（或同一肽链中的几个肽段）之间形成氢键而使结构稳定。
15．C：蛋白质二级结构的两种主要类型是α-螺旋结构和β-折叠结构。在α-螺旋结构中肽链上的所有氨基酸残基均参与氢键的形成以维持螺旋结构的稳定。在β-折叠结构中，相邻肽链或肽段之间形成氢键以维持结构的稳定，所以氢键是维持蛋白质二级结构稳定的主要作用力。离子键、疏水键和范德华力在维持蛋白质的三级结构和四级结构中起重要作用，而二硫键在稳定蛋白质的三级结构中起一定作用。
16．E：肽键是连接氨基酸的共价键，它是维持蛋白质一级结构的作用力；而硫键是2分子半胱氨酸的巯基脱氢氧化形成的共价键，它可以存在于2条肽链之间也可以由存在于同一条肽链的2个不相邻的半胱氨酸之间，它在维持蛋白质三级结构中起一定作用，但不是最主要的。离子键和氢键都是维持蛋白质三级结构稳定的因素之一，但此项选择不全面，也不确切。次级键包括氢键、离子键、疏水键和范德华力，所以次项选择最全面、确切。
17．A：用凝胶过滤柱层析分离蛋白质是根据蛋白质分子大小不同进行分离的方法，与蛋白质分子的带电状况无关。在进行凝胶过滤柱层析过程中，比凝胶网眼大的分子不能进入网眼内，被排阻在凝胶颗粒之外。比凝胶网眼小的颗粒可以进入网眼内，分子越小进入网眼的机会越多，因此不同大小的分子通过凝胶层析柱时所经的路程距离不同，大分子物质经过的距离短而先被洗出，小分子物质经过的距离长，后被洗脱，从而使蛋白质得到分离。
18．A：蛋白质的变性是其空间结构被破坏，从而引起理化性质的改变以及生物活性的丧失，但其一级结构不发生改变，所以肽键没有断裂。蛋白质变性的机理是维持其空间结构稳定的作用力被破坏，氢键、离子键和疏水键都是维持蛋白质空间结构的作用力，当这些作用力被破坏时空间结构就被破坏并引起变性，所以与变性有关。&&&&&&
19．A：蛋白质的一级结构即蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序决定蛋白质的空间构象，因为一级结构中包含着形成空间结构所需要的所有信息，氨基酸残基的结构和化学性质决定了所组成的蛋白质的二级结构的类型以及三级、四级结构的构象；二硫键和次级键都是维持蛋白质空间构象稳定的作用力，但不决定蛋白质的构象；温度及pH影响蛋白质的溶解度、解离状态、生物活性等性质，但不决定蛋白质的构象。
20．B：氨基酸即有羧基又有氨基，可以提供氢质子也可以接受氢质子，所以即是酸又是碱，是两性电解质。由氨基酸组成的蛋白质分子上也有可解离基团，如谷氨酸和天冬氨酸侧链基团的羧基以及赖氨酸的侧链氨基，所以也是两性电解质，这是氨基酸和蛋白质所共有的性质；胶体性质是蛋白质所具有的性质，沉淀反应是蛋白质的胶体性质被破坏产生的现象；变性是蛋白质的空间结构被破坏后性质发生改变并丧失生物活性的现象，这三种现象均与氨基酸无关。
21．E： 氨基酸分子上的正电荷数和负电荷数相等时的pH值是其等电点，即净电荷为零，此时在电场中不泳动。由于净电荷为零，分子间的净电斥力最小，所以溶解度最小。
22．B：蛋白质的一级结构是指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序，蛋白质中所含氨基酸的种类和数目相同但排列顺序不同时，其一级结构以及在此基础上形成的空间结构均有很大不同。蛋白质分子中多肽链的折叠和盘绕是蛋白质二级结构的内容，所以B项是正确的。
（四）是非判断题
1．错：脯氨酸与茚三酮反应产生黄色化合物，其它氨基酸与茚三酮反应产生蓝色化合物。
2．对：在肽平面中，羧基碳和亚氨基氮之间的键长为0.132nm，介于C―N 单键和C＝N 双键之间，具有部分双键的性质，不能自由旋转。
3．错：蛋白质具有重要的生物功能，有些蛋白质是酶，可催化特定的生化反应，有些蛋白质则具有其它的生物功能而不具有催化活性，所以不是所有的蛋白质都具有酶的活性。
4．错：α-碳和羧基碳之间的键是C―C单键，可以自由旋转。
5．对：在20种氨基酸中，除甘氨酸外都具有不对称碳原子，所以具有L-型和D-型2种不同构型，这两种不同构型的转变涉及到共价键的断裂和从新形成。
6．错：由于甘氨酸的α-碳上连接有2个氢原子，所以不是不对称碳原子，没有2种不同的立体异构体，所以不具有旋光性。其它常见的氨基酸都具有不对称碳原子，因此具有旋光性。
7．错：必需氨基酸是指人（或哺乳动物）自身不能合成机体又必需的氨基酸，包括8种氨基酸。其它氨基酸人体自身可以合成，称为非必需氨基酸。
8．对：蛋白质的一级结构是蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序，不同氨基酸的结构和化学性质不同，因而决定了多肽链形成二级结构的类型以及不同类型之间的比例以及在此基础上形成的更高层次的空间结构。如在脯氨酸存在的地方α-螺旋中断，R侧链具有大的支链的氨基酸聚集的地方妨碍螺旋结构的形成，所以一级结构在很大程度上决定了蛋白质的空间构象。
9．错：一氨基一羧基氨基酸为中性氨基酸，其等电点为中性或接近中性，但氨基和羧基的解离度，即pK值不同。
10．错：蛋白质的变性是蛋白质空间结构的破坏，这是由于维持蛋白质构象稳定的作用力次级键被破坏所造成的，但变性不引起多肽链的降解，即肽链不断裂。
11．对：有些蛋白质是由一条多肽链构成的，只具有三级结构，不具有四级结构，如肌红蛋白。
12．对：血红蛋白是由4个亚基组成的具有4级结构的蛋白质，当血红蛋白的一个亚基与氧结合后可加速其它亚基与氧的结合，所以具有变构效应。肌红蛋白是仅有一条多肽链的蛋白质，具有三级结构，不具有四级结构，所以在与氧的结合过程中不表现出变构效应。
13．错：Edman降解法是多肽链N端氨基酸残基被苯异硫氢酸酯修饰，然后从多肽链上切下修饰的残基，经层析鉴定可知N端氨基酸的种类，而余下的多肽链仍为一条完整的多肽链，被回收后可继续进行下一轮Edman反应，测定N末端第二个氨基酸。反应重复多次就可连续测出多肽链的氨基酸顺序。FDNB法（Sanger反应）是多肽链N末端氨基酸与FDNB（2,4-二硝基氟苯）反应生成二硝基苯衍生物（DNP-蛋白），然后将其进行酸水解，打断所有肽键，N末端氨基酸与二硝基苯基结合牢固，不易被酸水解。水解产物为黄色的N端DNP-氨基酸和各种游离氨基酸。将DNP-氨基酸抽提出来并进行鉴定可知N端氨基酸的种类，但不能测出其后氨基酸的序列。
14．对：大多数氨基酸的α-碳原子上都有一个自由氨基和一个自由羧基，但脯氨酸和羟脯氨酸的α-碳原子上连接的氨基氮与侧链的末端碳共价结合形成环式结构，所以不是自由氨基。
15．对：蛋白质是由氨基酸组成的大分子，有些氨基酸的R侧链具有可解离基团，如羧基、氨基、咪唑基等等。这些基团有的可释放H+ ,有的可接受H+& ,所以使得蛋白质分子即是酸又是碱，是两性电解质。蛋白质分子中可解离R基团的种类和数量决定了蛋白质提供和接受H+ 的能力，即决定了它的酸碱性质。
16．对：在具有四级结构的蛋白质分子中，每个具有三级结构的多肽链是一个亚基。
17．错：具有两个或两个以上肽键的物质才具有类似于双缩脲的结构，具有双缩脲反应，而二肽只具有一个肽键，所以不具有双缩脲反应。
18．错：二硫键是由两个半胱氨酸的巯基脱氢氧化而形成的，所以两个半胱氨酸只能形成一个二硫键。
19．对：盐析引起的蛋白质沉淀是由于大量的中性盐破坏了蛋白质胶体的稳定因素（蛋白质分子表面的水化膜及所带同性电荷互相排斥），从而使蛋白质溶解度降低并沉淀，但并未破坏蛋白质的空间结构，所以不引起变性。根据不同蛋白质盐析所需的盐饱和度分段盐析可将蛋白质进行分离和纯化。
20．错：蛋白质的空间结构包括二级结构、三级结构和四级结构三个层次，三级结构只是其中一个层次。
21．错：维持蛋白质三级结构的作用力有氢键、离子键、疏水键、范德华力以及二硫键，其中最重要的是疏水键。
22．错：具有四级结构的蛋白质，只有所有的亚基以特定的适当方式组装在一起时才具有生物活性，缺少一个亚基或单独一个亚基存在时都不具有生物活性。
23．错：蛋白质变性是由于维持蛋白质构象稳定的作用力（次级键和而硫键）被破坏从而使蛋白质空间结构被破坏并山个丧失生物活性的现象。次级键被破坏以后，蛋白质结构松散，原来聚集在分子内部的疏水性氨基酸侧链伸向外部，减弱了蛋白质分子与水分子的相互作用，因而使溶解度将低。
24．错：蛋白质二级结构的稳定性是由链内氢键维持的，如α-螺旋结构和β-折叠结构中的氢键均起到稳定结构的作用。但并非肽链中所有的肽键都参与氢键的形成，如脯氨酸与相邻氨基酸形成的肽键，以及自由回转中的有些肽键不能形成链内氢键。
（五） 问答题（解题要点）
1．答：蛋白质一级结构指蛋白质多肽链中氨基酸残基的排列顺序。因为蛋白质分子肽链的排列顺序包含了自动形成复杂的三维结构（即正确的空间构象）所需要的全部信息，所以一级结构决定其高级结构。
2．答：蛋白质的空间结构是指蛋白质分子中原子和基团在三维空间上的排列、分布及肽链走向。蛋白质的空间结构决定蛋白质的功能。空间结构与蛋白质各自的功能是相适应的。
3．答：（1）多肽链主链绕中心轴旋转，形成棒状螺旋结构，每个螺旋含有3.6个氨基酸残基，螺距为0.54nm,氨基酸之间的轴心距为0.15nm.。
（2）α-螺旋结构的稳定主要靠链内氢键，每个氨基酸的N―H与前面第四个氨基酸的C＝O& 形成氢键。
（3）天然蛋白质的α-螺旋结构大都为右手螺旋。
4．答：β-折叠结构又称为β-片层结构，它是肽链主链或某一肽段的一种相当伸展的结构，多肽链呈扇面状折叠。
（1）两条或多条几乎完全伸展的多肽链（或肽段）侧向聚集在一起，通过相邻肽链主链上的氨基和羰基之间形成的氢键连接成片层结构并维持结构的稳定。
（2）氨基酸之间的轴心距为0.35nm（反平行式）和0.325nm（平行式）。
（3）β-折叠结构有平行排列和反平行排列两种。
5．答：蛋白质的生物学功能从根本上来说取决于它的一级结构。蛋白质的生物学功能是蛋白质分子的天然构象所具有的属性或所表现的性质。一级结构相同的蛋白质，其功能也相同，二者之间有统一性和相适应性。
6．答：蛋白质变性作用是指在某些因素的影响下，蛋白质分子的空间构象被破坏，并导致其性质和生物活性改变的现象。蛋白质变性后会发生以下几方面的变化：
（1）生物活性丧失；
（2）理化性质的改变，包括：溶解度降低，因为疏水侧链基团暴露；结晶能力丧失；分子形状改变，由球状分子变成松散结构，分子不对称性加大；粘度增加；光学性质发生改变，如旋光性、紫外吸收光谱等均有所改变。
（3）生物化学性质的改变，分子结构伸展松散，易被蛋白酶分解。
7．答：维持蛋白质空间构象稳定的作用力是次级键，此外，二硫键也起一定的作用。当某些因素破坏了这些作用力时，蛋白质的空间构象即遭到破坏，引起变性。
8．答：蛋白质的重要作用主要有以下几方面：
（1）生物催化作用&& 酶是蛋白质，具有催化能力，新陈代谢的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。
（2）结构蛋白&& 有些蛋白质的功能是参与细胞和组织的建成。
（3）运输功能&& 如血红蛋白具有运输氧的功能。
（4）收缩运动&& 收缩蛋白（如肌动蛋白和肌球蛋白）与肌肉收缩和细胞运动密切相关。
（5）激素功能&& 动物体内的激素许多是蛋白质或多肽，是调节新陈代谢的生理活性物质。
（6）免疫保护功能&& 抗体是蛋白质，能与特异抗原结合以清除抗原的作用，具有免疫功能。
（7）贮藏蛋白&& 有些蛋白质具有贮藏功能，如植物种子的谷蛋白可供种子萌发时利用。
（8）接受和传递信息&& 生物体中的受体蛋白能专一地接受和传递外界的信息。
（9）控制生长与分化&& 有些蛋白参与细胞生长与分化的调控。
（10）毒蛋白&& 能引起机体中毒症状和死亡的异体蛋白，如细菌毒素、蛇毒、蝎毒、蓖麻毒素等。
9．答：（a）异硫氢酸苯酯；（b）丹黄酰氯；（c）脲、β-巯基乙醇；（d）胰凝乳蛋白酶；（e）CNBr; （f）胰蛋白酶。
10．答：（1）可能在7位和19位打弯，因为脯氨酸常出现在打弯处。
& （2）13位和24位的半胱氨酸可形成二硫键。
（3）分布在外表面的为极性和带电荷的残基：Asp、Gln和Lys；分布在内部的是非极性的氨基酸残基：Try、Leu和Val；Thr尽管有极性，但疏水性也很强，因此，它出现在外表面和内部的可能性都有。
说的太好了，我顶！
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