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9001内审员测试题及答案
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& 游泳遐想——人都要有目标
游泳遐想——人都要有目标电梯回复数：10 &|& 浏览数：472
放寒假了，这个短暂的寒假我给自己定了一个小目标，那就是每天早上抽出一点时间去游泳池游泳。这不放假第三天，我行动了两天。今天我在游泳池里想到一个问题，那就是“目标”问题。其实当下还真想了许多，现在想写下来，还得再缕缕。
其实我们每个人在生活中都会不自觉地给自己设计目标，只是这个目标对于自己来说是太大，或是太小，或是刚好而已。最后这个目标有没有实现。今天早上我去游泳，弟弟也去了。我先给自己定的目标是游一个小时。其实一开始我是定一千米，但是一圈25米，一圈一圈数我都数晕了。于是我想不然就游一个小时。后来弟弟来了，他给自己定的目标是2000米。在游之前他还跟我说不要跟他聊天，他要一直游，哼，我才不想跟他聊天呢。我也要游泳。其实我还想再问他一个问题，2000米，你不数晕了。（或者2000米对他来说那就一个目标，至于到底游多少，他自己应该心里有数。）
当时我也问了一下时间，我游了应该有二十分钟了，那还有四十分钟，感觉不是挺漫长的。所以我不以时间为目标，我相信自己之前应该也游了有500米了吧，那我接下来的目标就是500米，一个来回50 米，2个来回100米。每次两个来回我就自己心里默数。咦，发现自己很快就达成目标了。达到目标之后我也没有立刻停止，而是继续多游了100米，哈哈，这是我目标以外的100米，游完之后看看有点发皱的手指，我开心地上岸了。今天不仅达到了自己的预定目标，我还超额完成，是不是值得开心。
试想如果 我给自己定的目标是跟弟弟一样2000米，那我应该会觉得这个目标太难了，遥不可及，心累。这样子去完成这个目标，那就太累人了。
所以我悟到了人给自己定目标也是有讲究的，要视自己的情况量力而行，还有定的目标不要离自己太遥远，要好操作。人的一生中其实的许多的目标需要我们自己去达成。善于给自己定目标，学会给自己定目标，你不但会经常体会到成功的快乐，你也会感受到自己人生的与众不同。
本作品未经作者许可不得转载，转载请征求作者意见。擅自转载使用，宝宝地带将保留追究其法律责任的权利！
我不会游戏
亲，是游泳吧，不会学呗，其实也只会蛙泳！哈哈！
游泳的想法很好呢，亲爱的加油坚持下去
人活着就该有目标，这样才充实
冬天游泳对身体特别好
说的真好呢，定目标真的很有技巧，否则会打击自信心的。我现在就定我大多能实现的目标，不能再好高骛远了
是吗？冲亲这句话，我还真得坚持！
我不会游泳呢
亲爱的打字太快了
朝着目标迈进 生活就有希望啊
最新试读试用
试读：【试读】《叽叽喳喳的早晨》
试读：【第1220期试读】《婴幼儿睡眠全书》（）
试读：【第1219期试读】《故宫里的大怪兽》（）水的卫生微生物学检验
第38章&& 水的卫生微生物学检验
人类生活中不能缺少水，但水又是微生物生存的天然环境，水中微生物种类很多，大部分是非致病性的，部分为致病性的微生物。因此水在传播肠道传染病上起着很大的作用。为了保证饮水的卫生，必须对水源和饮用水进行定期的细菌学检验，有条件时，还应进行病毒学的检测。
一、目的要求
（一）、掌握水样的采集方法及鉴定程序。
（二）、掌握细菌总数和大肠菌群的检验。
（三）、熟悉饮用水、水源水、游泳池水卫生标准。
（四）、了解水的病毒学检验。
二、教学内容
（一）、水样的采集、保存、运送及鉴定程序。
（二）、细菌总数测定和大肠菌群的检验。
（三）、饮用水、水源水、游泳池水的卫生标准。
（四）、水的病毒学检验。
三、实验教学
水样的采集与检验。
第1节& 水卫生细菌学检测的水样采集
无菌采样瓶，乙醇灯。
1．供卫生细菌学检验用的水样瓶采集前必须进行灭菌，并需保证在运装、保存过程中不受污染。
2．在采自来水水样时，先用乙醇灯将水龙头消毒，然后将水龙头完全打开，放水5～10分钟，以排除管道内的贮水后再采水样。经常用水的水龙头放水1～3分钟即可采集水样。
3．取井水和江、河、湖、水库等地面水源的水样时，应选择有代表性的地点及水质可疑的地方，一般应在距水面10～15 cm深处取样。
4．收集含余氯的水样时，应按每500mL水样加入1.5%硫代硫酸钠溶液2mL至水样瓶的空瓶中，然后在101.33 kPa20分钟高压灭菌，其作用是中和水样中的余氯，终止余氯的杀菌作用，保证实验结果的准确可靠。
5．采样时，所采的水量为采样瓶容量的80%左右，以便在检验时可充分摇动水样。
6．采得水样后应立即记录水样名称、采样地点、采样时间等项目，并应从速检验，不能久放，一般从采集到检验不应超过2小时，如条件许可，应放在冰箱中保存，但也不应超过4小时。
第2节& 水中细菌总数的测定
细菌总数测定是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌的总数。本实验以1mL水样在营养琼脂培养基中，于37℃培养24小时后所生长的细菌菌落的总数，作为水体受细菌污染程度的标志（见表）
目的要求．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
　．了解水源水的平板菌落计数的原则。
基本原理：本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
表38-1&&& 一般水源水中细菌总数与水的清洁程度（参考）
不太清洁水
1000～10000
10000～100000
极不清洁水
大于或等于100000
我国《生活饮用水卫生标准》GB5749-85中关于生活饮用水的细菌标准的具体规定：
（1）细菌总数：1mL水中不超过100个。
（2）大肠菌群数：1L水中不超过3个。
（3）若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用的水源水，大肠菌群数平均每升不得超过10000个。&
一、生活饮用水的检验
无菌1mL吸管1支、无菌平皿3个、营养高层琼脂3支、恒温培养箱、放大镜。以上材料用量均以一个水样计算。
1．将水样用力震摇20～25次，以分散可能存在的细菌凝团。
2．以无菌操作法吸取1mL充分摇匀的水样，注入无菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却至45℃左右的营养琼脂于上述平皿中，并立即旋转平皿，使水样与琼脂充分混匀。每个水样应同时做二个平板，每次检验时另用一个平皿只倾注营养琼脂作空白对照。
3．待平板内琼脂冷却凝固后，翻转平板，使底面向上，置37℃培养24小时后取出，计算平板内菌落数目，二个平板中平均菌落数即为1mL水样中的细菌总数。
二、水源水的检验
无菌1mL吸管6支、10mL吸管4支、无菌蒸馏水90mL 1瓶（内盛适量玻璃球）、无菌蒸馏水9mL 3支、无菌平皿9个、营养高层高脂9支、恒温培养箱。
以上材料用量均以一个水样计算。
1．以无菌操作法吸取10mL充分混匀的水样，注入盛有90mL灭菌水的玻璃瓶中，混匀成1∶10稀释液。
2．吸取1∶10稀释液1mL注入盛有9mL灭菌水试管中，混匀成1∶100稀释液。按同法依次稀释成1∶1000、1∶10000稀释液等备用。吸取不同浓度的稀释液时，每次必须更换吸管。
3．用1mL无菌吸管吸取2～3个适当浓度的稀释液1mL，分别注入无菌平皿中。以下操作步骤同生活饮用水的检验方法。
4．菌落计数及报告方法：
作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板上的菌落数后，应求出同一稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同一稀释度的平均数时，若其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可数此一半平板上的细菌菌落数乘以2代表全平板菌落数，然后再求该稀释度的平均菌落数。
各种不同情况下的计算方法：
①首先选择平均菌落在30～300之间者进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则即以该平均菌落数乘其稀释倍数报告之（见表38-2例1）。
②若有两个稀释度，其平均菌落数在30～300之间，则应按两者菌落数总数之比值来决定。若其比值小于2，应报告两个数的平均数，若大于2则报告其中较少的菌落总数（见表38-2例2及3）。
③若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表38-2例4）
④若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表38-2例6）。
⑤菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实际数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示（见表“报告方式”栏）。在报告菌落数为“无法计数”时，应注明水样的稀释倍数。
第3节&& 大肠菌群的测定
大肠菌群系指需氧或兼性厌氧、在37℃24小时内能发酵乳糖产酸产气的革兰阴性无芽胞杆菌。由于经水传播的疾病主要为肠道传染病，而大肠菌群主要来源于人畜粪便，故以肠道中的细菌作为水被粪便污染的指标，来评价水的卫生质量较为合理。
大肠菌群数系指一升水中所含大肠菌群的数目，也即总大肠菌群数。我国生活饮用水卫生标准（试行）（TJ20-70）中规定大肠菌群数1升水中不超过3个。
一、发酵法
发酵法是根据大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气的特性进行检验的。此法适用于各种水样，为一般实验室常用的方法。
无菌1mL吸管3支、10mL吸管2支、无菌100mL量筒1个、无菌水9mL 1支、90mL 1瓶、革兰染液1套、显微镜、恒温箱、三倍浓缩乳糖蛋白胨培养基、品红亚硫酸钠或伊红美蓝平板、乳糖蛋白胨培养基。
1．生活饮用水
按下列3个步骤进行检验：
（1）初步发酵实验：在二个各装有已灭菌50mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管或烧瓶中（内有倒管），以无菌操作各加入水样100mL，在10支装有已灭菌5mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管），以无菌操作各加入水样10mL。混合后置于37℃恒温箱中培养24小时。
（2）平板分离：经培养24小时后，将产酸产气及只产酸不产气的发酵管分别接种于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基上，再置于37℃恒温箱内培养18～24小时，挑选符合下列特征的菌落，取菌落的一小部分进行涂片、革兰染色、镜检。
品红亚硫酸培养基上的菌落：
紫红色，具有金属光泽的菌落。
深红色，不带或略带金属光泽的菌落。
淡红色，中心色较深的菌落。
伊红美蓝培养基上的菌落：
紫红色，具有金属光泽的菌落。
紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落。
淡紫红色，中心色较深的菌落。
（3）复发酵实验：上述涂片镜检如为革兰阴性无芽胞杆菌，则挑取该菌落的另一部分再接种于普通浓度乳糖蛋白胨培养液中(内有倒管)，每管可接种分离自同一初发酵管的最典型的菌落1～3个，然后置于37℃恒温箱中培养24小时，有产酸产气者（不论倒管内气体多少皆作为产气论），即证实有大肠菌群存在。
根据证实有大肠菌群存在的阳性管（瓶）数查表，报告每升水样中的大肠菌群数。
（1）将水样作1∶10及1∶100稀释。
（2）分别吸取1mL 1∶100稀释水样、1 mL
1∶10稀释水样及1 mL原水样，分别注入 装有10mL普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管）。另取10 mL原水样，注入装有5 mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管）。如为较清洁水样，可再取100 mL原水样注入装有50 mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管或烧瓶中（内有倒管）。以下的检验步骤同上述生活饮用水的检验方法。
（3）根据证实有大肠菌群存在的阳性管（瓶）数查表，报告每升水样中的大肠菌群数。
二、滤膜法
滤膜为微孔薄膜。将水样注入已灭菌的放有滤膜的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于品红亚硫酸钠培养基上进行培养。因大肠菌群细菌发酵乳糖，可在滤膜上出现紫红色具有金属光泽的菌落，计数和鉴定滤膜上生长的大肠菌群菌落，计算出每一升水样中含有的大肠菌群数。本法适用于杂质较少的水样。
滤器（容量为500 mL）、滤膜（3号）、抽气设备、无齿镊子、品红亚硫酸钠培养基、乳糖蛋白胨半固体培养基、其他材料同“细菌总数”及“发酵法”。
1．准备工作
（1）滤膜鉴定实验：用滤膜过滤已知大肠菌群悬液，过滤后，将滤膜贴于品红亚硫酸培养基上，经37℃培养16～18小时，滤膜上应生长出具有上述大肠菌群典型特征的菌落。随即以上述已过滤的滤液，按种于乳糖蛋白胨液，经37℃培养24小时，应无产酸，产气现象，即证实滤膜能把大肠菌群全部截留在滤膜上。滤膜经过鉴定，符合以上要求时才能使用。
（2）滤膜灭菌：将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次15分钟。前二次煮沸后需换水洗涤2次～3次，以除去滤膜制作过程中的残留物。
（3）滤器灭菌：101.33 kPa高压蒸汽灭菌20分钟。也可用点燃的乙醇棉球，火焰灭菌。
2．过滤水样
（1）用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放于已灭菌的滤床上，稳妥地固定好滤器，将333 mL水样注入滤器中，加盖，打开滤器阀门，在负0.5大气压下进行抽滤。
（2）水样滤完后，再抽气约5秒钟，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基，滤膜截留细菌面向上与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平板倒置，放入37℃恒温箱内培养16～18小时。
3．观察结果
（1）挑选符合下列特征菌落进行涂片，革兰染色，镜检。
紫红色，具有金属光泽的菌落。
深红色，不带或略带金属光泽的菌落。
淡红色，中心颜色较深的菌落。
（2）凡革兰染色系阴性无芽胞杆菌，再接种乳糖蛋白胨半固体培养基（接种前应将此培养基放入水浴中煮沸排气，待冷却凝固后方能使用），经37℃培养6～8小时，产气者，则判定为大肠菌群阳性。（如不采用半固体培养基，也可改用乳糖蛋白胨培养液）。
（3）一升水样中大肠菌群数等于滤膜上生长的大肠菌群菌落总数乘以3。滤膜上生长的菌落一般以不超过60个为宜，否则过于稠密难以准确计数。
表38-3&& 大肠菌群数检数表
接种水样总量300 mL（100mL2份，10mL10份）
大于或等于230
表38-4&& 大肠菌群数检数表
接种水样总量111.1 mL
(100 mL、10 mL、1 mL、0.1 mL各一份)
大于或等于2380
表38-5& 大肠菌群数检数表
接种水样总量11.11 mL
（10 mL、1 mL、0.1 mL、0.01 mL各一份）
大于或等于23800
第4节&& 大肠菌群的一步法测定
大肠菌群作为水卫生质量及被大便污染的指标，在卫生细菌学的检测中具有很重要的价值。检测大肠菌群的三步发酵法操作繁琐、费时费力，不太适合大批量样品检测的需要。而改良一步法操作简便，结果迅速、准确。其基本原理是大肠菌群类细菌在发育过程中产生琥珀酸脱氢酶，它可以还原氯化三苯四氮唑（TTC）使之成为红色色素甲月替，导致大肠菌群的菌落呈红色，这一反应是不可逆的。计算红色菌落的数目并乘以稀释倍数即得大肠菌群数，红色菌落加非红色菌落再乘以稀释倍数即为样品中的细菌总数。
1．待测样品：大肠杆菌与葡萄球菌的混合菌液或待测水样。
（1）牛心浸液：新鲜牛心500克，去脂肪、筋、血管，并绞碎，置1000 mL蒸馏水中，-4℃冰箱24小时，不时搅拌。然后将其置50～60℃水浴3～4小时，再逐渐加热至100℃，持续1～2分钟。经纱布和滤纸过滤，将滤液调至1000 mL，高压蒸汽灭菌后备用。
（2）蛋白胨1.0克，NaCl 0.5克，1%去氧胆酸钠0.5 mL，磷酸氢二钾0.27克，乳糖1.0克，琼脂0.5克，牛心浸液100 mL，调pH至7.0～7.2，高压蒸汽灭菌冷至60℃后加入TTC（1.5% TTC 1 mL/100 mL培养基），之后倒入无菌平皿中，待凝固。
3．L形玻棒
1．将待测样品用无菌蒸馏水作1∶10，1∶100，1∶1000，1∶10000稀释后，于每一平皿中加入1 mL，以无菌L形玻棒铺平。
2．待平板稍干后，置37℃培养10～15小时，观察结果。
菌落呈红色，周围微黄为阳性，即为大肠菌群的细菌；菌落不出现红色为阴性。在此实验中，红色菌落为大肠杆菌，白色菌落为葡萄球菌。
计数红色菌落数乘以稀释倍数即为样品中的大肠菌群数，红色菌落加白色菌落再乘以稀释倍数即为样品中的细菌总数。
第5节& 水的病毒学检验
随着生活水平的日益改善，人们对生活饮用水的卫生要求不断提高。由水传播的病毒性 疾病的流行在许多国家和地区都有报告。为确保饮用水的质量，不但要对水进行卫生细菌学检验，对水源水和饮用水中肠道病毒的检测也具有重要的现实意义。
【原理】水中肠道病毒的检测分为水样浓缩、细胞培养、病毒检测三部分。本实验采用了适合于一般实验室条件下开展水病毒检测的滑石粉-硅藻土浓缩系统。其基本原理是病毒与滑石粉发生电化学作用产生一种可逆性结合。在酸性环境中病毒带正电荷，易吸附在滑石粉上；在碱性环境中，用洗脱液能有效地将吸附于滑石粉上的病毒洗脱下来。病毒不能独立繁殖，必须寄生于细胞内才能增殖。由于病毒在敏感细胞中可使细胞产生病变，并在一定条件下形成蚀斑。所以将待检水样接种于敏感细胞中，根据细胞病变效应(CPE)可定性判断病毒的有无；根据空斑形成单位(plaque forming unit，PFU)来定量计算水中病毒的含量。
仪器及器皿：高压灭菌器、干燥箱、普通冰箱、低温冰箱、真空泵、双蒸馏水器、倒置显微镜、二氧化碳（）培养箱、净化工作台、空气压缩机、蔡氏滤器、分析天平、止血钳、细胞培养瓶及瓶塞、青霉素瓶及瓶塞，抽滤瓶等。
试剂及细胞：青霉素万单位，链霉素万单位，培养液，小牛血清灭活：琼脂，营养琼脂～℃，胰酶消化液，平衡盐液，牛肉浸膏洗脱液，结晶紫溶液，滑石粉硅藻土混悬液，肠道病毒的敏感细胞：细胞
1．水样处理
　　采样前自来水龙头经常规消毒，放水分钟后取样。按的比例迅速加入的硫代硫酸钠（）溶液脱氯作水源水样时不用加硫代硫酸钠（）脱氯，其他处理步骤与自来水同，再以的比例将平衡液加入水样中以促进病毒的吸附，充分混匀，用氯化氢（）调为。
2．水样浓缩
（）滑石粉硅藻土吸附层的制备
　　将一张直径的新华滤纸平铺于直径的蔡式过滤器网板上，用无菌水浸湿，将滑石粉硅藻土混悬液倒在浸湿的滤纸上，加压抽滤，使之形成均匀而平整的薄层，然后盖上两张直径相同的滤纸。
（）浓缩水样
　　将处理好的水样加到吸附层上加压过滤。待水样全部通过吸附层后，用的牛肉浸膏洗脱液洗脱吸附层上的病毒，抽滤，收集洗脱液。用氯化氢（）调值至左右。用的微孔滤膜抽滤除菌，得到水样浓缩液，置℃冰箱待用。
3．细胞培养
　　将长成单层的细胞生长液倒掉，加入适量的胰酶消化液消化，加入适量的生长液，用吸管吹打分散细胞，再用生长液稀释并分装于细胞培养瓶中，℃培养。
4．病毒的检测
细胞成片后，弃去生长液，加水样浓缩液，℃吸附～小时，每隔分钟摇动一次。
（）细胞病变实验
将接种过的细胞倒掉水样液，加入维持液，℃培养，逐日观察病变。设一瓶细胞空白对照，即细胞不经过接种直接加维持液。肠道病毒导致细胞病变为：细胞圆缩、折光度增强、并逐渐脱落悬浮。
（）细胞空斑实验
　　将接种过的细胞倒掉水样液，加适量的～℃营养琼脂平铺待凝。凝固后℃翻转培养小时，然后用甲醛液固定分钟，甩掉琼脂，自来水冲洗干净，再加入结晶紫染色分钟，自来水冲洗，观察空斑并计数。设一瓶空白对照，即细胞不经接种做空斑实验。
水中肠道病毒含量计算公式：
其中，水中病毒浓度，单位；升
　　　每瓶空斑数，单位：个
接种量，单位：
&　水样浓缩量，单位：
水样采集量，单位：