关注今日：0 | 主题：278807
微信扫一扫
扫一扫，下载丁香园 App
即送15丁当
电泳不出结果，连loading buffer也跑不出来，都停在加样孔中
页码直达：
这个帖子发布于12年零7天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
在别人的胶上和他们的产物同时跑电泳也是一样，高手指点一下吧。难道RT-PCR用的试剂会对溴芬兰发生反应吗？
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
重新做吧，原因不好说。肯定是什么地方出错了，BPB是不会和RT试剂反应的，要找出原因还不如重新来过。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
肯定是胶的问题，建议重新制胶再作。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
郁闷啦，又做不出来，已经知道胶和TBE都没有错（用以前的PCR结果都可以跑出来），加样孔周围似乎有淡淡的产物，溴芬兰好像往阴极走了一些。在线等高手的指教
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
丁香园中级站友
:):)&在别人的胶上和他们的产物同时跑电泳也是一样?&啥意思?和人家同跑,人家能跑出来?你不能?如果是这样,你自己都知道是啥原因,你除了PCR 引物和标本和别人不一样,你和别人都一样,如果和你的师兄试剂盒都一样,你所做的就是排除你的PCR 引物和标本.;);)RT-PCR用的试剂对溴芬兰一般不会发生反应,不知道你是用PCR后的产物跑电泳的还是用连接好的质粒DNA分子跑的,我所知道的如果你用后者的产物跑的,你的质粒提取的后部分,就是用乙醇洗脱的时候,一定要把乙醇洗脱干净,如果不干净,加样时你的溴芬兰就会很快跑掉,效果就会不好.
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
yangyang73 edited on
就是别人的能跑出来，而我的不行。引物和反应试剂与以前一样，以前电泳都正常。将以前的产物与现在的产物一起跑电泳，以前的也正常，单独跑溴芬兰也正常。现在可以肯定的是溴芬兰、胶和电泳液都没问题，问题肯定是产物上或试剂，可想不同是什么原因，可以造成这种现象、请高手指点准备明日换用别人的试剂再试试。郁闷！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
这种现象在我们实验室也出现过，当日是ＲＴ－ＰＣＲ，结果产物只停留在点样口附近，但只是少数情况．后来我们问了一下宝生物，他们说也经常遇到，称为＂挂口现象＂．但是什么原因我们也没弄清楚．
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
企盼更多高手指点，现在我们的实验简直处于近乎停顿的状态啦，怎么办啊？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
是不是电泳仪的问题啊？检查一下接口
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
你们检查一下电泳用的梳子是不是弄毛了．
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
电泳仪应该没有问题的，因为和别人的产物一起跑电泳别人就能跑出来。TBE、琼脂糖胶、电泳仪这些外部条件都一样的，就是产物不同，今天上午又拿质粒DNA做了PCR，然后电泳，还上面一样。电泳不出结果，连loading buffer也跑不出来，都停在加样孔中
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
遇到这种情况，最好从头再来，很难说是什么原因。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
遇到这种情况，最好从头再来，很难说是什么原因。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
今天重新配的TBE，换用别人的PCR试剂重新做还是一样啊。现在已知：TBE、胶、试剂、PCR仪、电泳槽电泳仪都没有问题。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
怎么办啊？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
建议你用别人的质粒DNA和引物自己做一下，看看能不能做出正确的结果。如果能做出来，才能证明问题出在你的质粒DNA或引物上。我怀疑可能是你操作中有什么地方没注意到。自己同时做一下别人的和自己的东西试一试。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我前不久看师兄做实验也出现这种问题,他重新做了一次,用同样的材料设备却能跑出来.原因他也不知道.所以你最好重新再试试.
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
今天我跑垂直板也出现这种情况!我换了一次TBE,稍微好一点!但是别人认为并不是TBE用的太久
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
另外,这两天老是烧胶,但是电泳时间并不是很长,不知为什么?
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园生物秀人才网[]
打造生物医药领域人才求职与企业招聘的专业平台
欢迎加入最专业的生命科学交流社区，结交业内好友，体验更多功能。
才可以下载或查看，没有帐号？
DNA电泳10来分钟，loading buffer中的溴酚蓝就不在了，照相却发现什么东西都没有？同一块胶，同样的电泳缓冲液，上午用着挺好，下午就这样了~~~
该用户从未签到
生物秀版主
生物秀人才网[]
打造生物医药领域人才求职与企业招聘的专业平台
就是说你的胶用了两次？中间间隔了几个小时？
该用户从未签到
生物秀人才网[]
打造生物医药领域人才求职与企业招聘的专业平台
恩，到了一块18个孔的胶，没有用完，就接着用了，我们一直都这样做的，请问这样有什么不好吗？
该用户从未签到
同一块胶？难道你用一块胶跑两次电泳？你胶里面的离子都跑完了，不能跑第二次的。
该用户从未签到
生物秀版主
楼上说的即是。再者，照相的时候，胶里的EB效果也在不断消失，你可以尝试把胶再染一下看看。
胶其实可以反复用，但是最好是再溶，然后再加EB使用。
该用户从未签到
生物秀举人
换下TAE 或者TBE，胶可以反复用，这个是偷懒的方法，经过实践检验，可用，但奉劝你最好是一次性应用
该用户从未签到
定期换TAE吧，每次配少量的凝胶，用完之后在配制
该用户从未签到
生物秀举人
电极没接反？
该用户从未签到
假如你配胶多了的话，可以用多少就切出来，剩下的，可以用一次性手套装着放到四度冰箱，没有关系的，还有用过的胶也也可以回收，用来做检测，这样就可以节省资源，用的时候一定要多加一点缓冲液，重新溶解，而且时间长一点，这样效果还是挺好的。我觉得你说的loading buffer不见了，会不会是因为点样的时候把孔弄穿了，还有就是你的DNA会不会还有酒精残留，这样的话，loading buffer也会流失掉的。希望我的意见对你有点启发！愿你实验成功！
该用户从未签到
生物秀举人
同意楼上的，要注意电极，酒精残留，孔是否完整。
另，你的胶是否很薄，经常制胶的同学们会发现，其实加样孔的高度要比胶面高出一些，你看到样品已经加到孔中，可在电泳的过程中，因为胶面要低得多，所以大多样品在平行的运动中已经散出胶面。
未命名.JPG (6.08 KB, 下载次数: 4)
10:15 上传
更新你的简历，加入生物秀人才库，高薪工作基因编辑峰会支持人类胚胎研究(胚胎、基因细胞治疗：生物医药产业下一个风口(细胞治生物秀论坛手机版全新改版,更快速度,更好体聚焦“基因剪刀”奠基人的科研历程
12345678910
murongxiaoxiao大叔级摄影爱好者，喜欢分享绝对零度积极有责任心，热心公益事业yiii红米达人，爱拍照的北京女孩跑琼脂糖凝胶电泳的时候loading buffer 没跑出去是什么原因
生曰快樂_0418
以平板电泳为例，不知你指的是从上下垂直表面跑出去还是指水平跑出去呢？
如果是水平方向的话，那是因为跑的时间没有足够久，一般我们都不会跑那么久让他跑出去的，那样不只浪费时间还影响实验。
如果你是指上下垂直表面的话：是因为跑电泳时候是在一个水平的电场中进行的，电源正负两极之间的电场也是水平方向而不是弯曲的，loading buffer混合的样品中的电子当然也是顺着电场的水平...
为您推荐：
扫描下载二维码请高手帮忙看看这张电泳图 - 实验交流 - 生物秀
标题: 请高手帮忙看看这张电泳图
摘要: [请高手帮忙看看这张电泳图] pET的表达质粒1ml菌液离心得到的菌加入100ulloading buffer，煮沸5min冰箱放了两三个小时才跑的电泳只是粗略12000离心了2分钟5%的浓缩胶，7 5%的分离胶，30V浓缩胶，80V分离胶，大概跑了3个小时，溴芬兰到了最底下。有dxy的朋友告诉我可能菌体太多，loading buffer不够，或者核酸太多加样时候样品有点果冻状，很难加样，容易一团地飘起。电泳结果如下图，还有几 关键词:[条带 电泳 电泳图 浓缩胶 分离胶 冰箱 菌体]……
pET的表达质粒1ml菌液离心得到的菌加入100ulloading buffer，煮沸5min冰箱放了两三个小时才跑的电泳只是粗略12000离心了2分钟5%的浓缩胶，7.5%的分离胶，30V浓缩胶，80V分离胶，大概跑了3个小时，溴芬兰到了最底下。有dxy的朋友告诉我可能菌体太多，loading buffer不够，或者核酸太多加样时候样品有点果冻状，很难加样，容易一团地飘起。电泳结果如下图，还有几个疑问首先，每个孔道都很多竖向的条带，是否是因为上扬量太大呢？其次，就像中间第五道marker，条带都是W型的弯弯曲曲，不知道什么问题第三还是marker问题。我用的是takara的宽泛marker，应该是200,116,97.2,66.4,44.3,29,20.1,14.3,6.5一共9条条带，其中66.4应该是亮带。但是电泳出来的marker似乎条带数量不足，而且条带相对位置和目录上的图不一样，亮带位置也不对，可能照片不够清楚，我把我看到的marker位置都标出了数字，能不能帮忙看看，究竟是少了哪几条？最后还有一个问题是染色和洗脱的时候，似乎胶缩水了，会是因为我的配方不对吗？多谢帮忙。
据图初步估计样品可能提得不好，一般跑起来有竖线下来的，样品没有处理好，增加离心时间，重提下看。条带不直应该是电泳液或者是胶没有配好。胶缩水可能是你的液体中甲醇浓度太高了。Mark的位置就难说了。希望对你有所帮助，祝实验顺利！
请问这个蛋白应该怎么个提法呢？我没有提纯我的目标蛋白，只是跑的细菌的全蛋白
你的PAGE胶做的不好!菌体的量我觉得还行,你可以不用调整; 你试试新的缓冲液,我觉得你的缓冲液有问题. 我不知道你的蛋白marker是否分装放在-20度的,不过Takara的Marker也一般啊.还有你下次跑全菌电泳时,Loading buffer 中DTT的量要够,煮的时间可以延长到10分钟,最高转速离心5分钟,立即上样.你目的蛋白的分子量多大啊? 为什么跑7.5%的胶啊?
我的蛋白有1200个氨基酸左右，可能有130kD以上吧蛋白marker配好以后放到四度了你说的缓冲液，是指配胶的缓冲液还是电泳缓冲液呢？
电泳缓冲液.冻存在-20度最好分装
pET的表达质粒1ml菌液离心得到的菌加入100ulloading buffer，煮沸5min冰箱放了两三个小时才跑的电泳只是粗略12000离心了2分钟5%的浓缩胶，7.5%的分离胶，30V浓缩胶，80V分离胶，大概跑了3个小时，溴芬兰到了最底下。有dxy的朋友告诉我可能菌体太多，loading buffer不够，或者核酸太多加样时候样品有点果冻状，很难加样，容易一团地飘起。电泳结果如下图，还有几个疑问首先，每个孔道都很多竖向的条带，是否是因为上扬量太大呢？其次，就像中间第五道marker，条带都是W型的弯弯曲曲，不知道什么问题第三还是marker问题。我用的是takara的宽泛marker，应该是200,116,97.2,66.4,44.3,29,20.1,14.3,6.5一共9条条带，其中66.4应该是亮带。但是电泳出来的marker似乎条带数量不足，而且条带相对位置和目录上的图不一样，亮带位置也不对，可能照片不够清楚，我把我看到的marker位置都标出了数字，能不能帮忙看看，究竟是少了哪几条？最后还有一个问题是染色和洗脱的时候，似乎胶缩水了，会是因为我的配方不对吗？多谢帮忙。加样的时候，用点温水加热一下样品，否则就会出现果冻状，特别是在冬天。因为loading buffer中的SDS很容易析出。加样量尽量要小一点，我的体会是10ul以下。所以你的样品要浓一点。marker不清楚，你可以加大一下上样量。200,116,97.2,66.4,44.3,29,20.1,14.3,6.5一共9条条带，这样的marker，最好胶的浓度大一点。你用15％试一下。条带弯曲，最有可能的就是，配胶溶液PH不对，你重新配一下。
我觉得上样时呈果冻状是核酸太多的缘故，因为我以前也遇见过。当时我在冰浴里超声后，再离心，效果就不错。超声切切要冰浴，并且要时间短，多次超，免得发热破坏蛋白。离心后沉淀要瓷实，上清不能有拉丝，就说明可以了。
1：煮沸5分钟已经足够了，样品呈果冻状是核酸太多，可以超声破碎，如果嫌麻烦，可以再加PBS，离心，减少蛋白含量！2：MAKER条带不够，可能是丙烯酰胺质量问题，纯度不够！3：条带不直，弯弯曲曲的，多半是因为胶没有完全聚合！4：最重要的一个原因：重新测量一下你分离胶/浓缩胶的PH值！它们在低温状态下分别是：8.8/6.8
非常感谢各位，超声了以后，样品的确不粘了。我洗脱液里面掺了点水，胶后来就没缩水了，估计当初洗脱液配方不对用10%的胶再跑了一次marker，似乎条带的数目和相对位置似乎又对了，不过因为是转膜以后用丽春红染来看的，看得不太清楚，也不太确定。会不会是因为7.5%的胶太稀，会对marker有很大影响？
相关热词：
生物秀是目前国内最具影响力的生物医药门户网站之一，致力于IT技术和BT的跨界融合以及生物医药领域前沿技术和成功商业模式的传播。为生物医药领域研究人员和企业提供最具价值的行业资讯、专业技术、学术交流平台、会议会展、电子商务和求职招聘等一站式服务。
官方微信号：shengwuxiu
电话：021-