非洲猪瘟病毒科_医学百科
非洲猪瘟病毒科
医学百科提醒您不要相信网上药品邮购信息！
目录1 拼音fēi zhōu zhū wēn bìng dú kē2 英文参考Asfiviridae3 中文名称非洲猪瘟病毒科4 英文名称Asfiviridae5 分类类型科6 非洲猪瘟病毒科成员&&& 属
属（Asfivirus）
非洲猪瘟病毒（African swine fever virus）
非洲猪瘟病毒-Ba71V 株（African swine fever virus-Ba71V）
非洲猪瘟病毒-LIL20/1株（African swine& fever virus-LIL20/1）
非洲猪瘟病毒-LIS57株（African swine& fever virus-LIS57）
7 非洲猪瘟病毒科基本特性非洲猪瘟病毒科仅含一个属 Asfivirus，代表种为非洲猪瘟病毒科成国际委员会第四次报告中曾归于，在第五次报告中又归入，最近才成为一个的科。 非洲猪瘟病毒粒子20面体对称，直径172－220nm，有两层以上衣壳，衣壳外有囊膜。具有CD2、IKB和C型血凝素。ASFV具有猪的特性，但经后丧失这种特性，这可能是病毒表面糖蛋白被破坏的缘故。这种吸附特性也可被。 ASFV病毒组为双链，全长170101 bp，约含151个ORFs，其中113个ORFs的病毒蛋白或已清楚。病毒5个基因编码膜蛋白、分泌性蛋白、参与、和蛋白修饰的酶，这些基因可能具有调节病毒－宿主间的关系、病毒和持续性的功能。病毒基因组还含有MY-DII6/gadd 343/ri 34.5, bcl-2/bax, iap, Nifs和ERV1等基因。相关文献
参与评价： ()
欢迎您对非洲猪瘟病毒科进行讨论。您发表的观点可以包括咨询、探讨、质疑、材料补充等学术性的内容。我们不欢迎的内容包括政治话题、广告、垃圾链接等。请您参与讨论时遵守中国相关法律法规。
昵称(必填)
电子邮箱(我们会为您保密) (必填)
特别提示：本文内容为开放式编辑模式，仅供初步参考，难免存在疏漏、错误等情况，请您核实后再引用。对于用药、诊疗等医学专业内容，建议您直接咨询医生，以免错误用药或延误病情，本站内容不构成对您的任何建议、指导。
本页最后修订于 日 星期六 16:47:35 (GMT+08:00)
关于医学百科 | 隐私政策 | 免责声明
链接及网站事务请与Email:联系 编辑QQ群：8511895 （不接受疾病咨询）猪瘟病毒存活时间 猪瘟疫苗
按模块条件查看
猪瘟病毒存活时间 猪瘟疫苗
信用指数：
摘要：猪瘟是猪的一种急性接触性传染病，又称猪霍乱。是威胁养猪业的主要传染病之一，其特征是：急性，呈败血性变化，实质器官出血，坏死和梗死；慢性呈纤维素性坏死性肠炎，后期常有副伤寒及巴氏杆菌病继发。下面小编就给大家介绍猪瘟病毒存活时间以及猪瘟疫苗，希望能给广大读者带来帮助。
猪瘟病毒存活时间 猪瘟疫苗
猪瘟俗称“烂肠瘟”，是由黄病毒科猪瘟病毒属的猪瘟病毒引起的一种急性、发热、接触性传染传染病。具有高度传染性和致死性。
猪瘟俗称"烂肠瘟"是一种具有高度传染性疫病，是威胁养猪业的主要传染病之一，其特征是：急性，呈败血性变化，实质器官出血，坏死和梗死；慢性呈纤维素性坏死性肠炎，后期常有副伤寒及巴氏杆菌病继发。
猪瘟是猪的一种急性接触性传染病，又称猪霍乱。1885年首先在美国发现，以后传播到世界各大洲。中国大部分省都有发生。1903年美国兽医学家德希尼兹和多赛特鉴定本病的病原是披盖病毒科的瘟病毒属（Pestivirus）中的猪瘟病毒。主要通过直接接触，或由于接触污染的媒介物而发病。消化道、鼻腔粘膜和破裂的皮肤均是感染途径。一年四季都可发生，以春夏多雨季节为多。
人工接种的猪，一般在36～48小时后体温升高。而自然感染的潜伏期常为3～6天，间有延长到24天的。典型病例表现为最急性、亚急性或慢性病程，死亡率高。最急性型较少见，病猪体温升高，常无其他症状，1～2天内死亡。急性型最常见，体温可上升到41℃以上，食欲减退或消失，可发生眼结膜炎并有脓性分泌物，鼻腔也常流出脓性粘液，间有呕吐，有时排泄物中带血液，甚至便血。初期耳根、腹部、股内侧的皮肤常有许多点状出血或较大红点。病程一般为1～2周，最后绝大多数死亡。亚急性型常见于本病流行地区，病程可延至2～3周；有的转为慢性，常拖延1～2个月。表现粘膜苍白，眼睑有出血点。皮肤出现紫斑，病猪极度消瘦。死亡以仔猪为多，成年猪有的可以耐过。非典型病猪临诊症状不明显，呈慢性，常见于“架子猪”。剖检时急性型以出血性病变为主，常见肾皮质和膀胱粘膜中有小点出血；肠系膜淋巴结肿胀，常出现出血性肠炎，以大肠粘膜中的钮扣状溃疡为典型。
根据流行病学、临诊症状和病理变化可作出初诊。实验室诊断手段多采用免疫萤光技术、酶联免疫吸附测定法、血清中和试验、琼脂凝胶沉淀试验等，比较灵敏迅速，且特异性高。中国现推广应用免疫萤光技术和酶联免疫吸附测定法。采用抗猪瘟血清在病初可有一定疗效，此外尚无其他特效药物。中国的猪瘟兔化弱毒疫苗免疫期可达一年以上，已被公认为一种安全性良好、免疫原性优越、遗传性稳定的弱毒疫苗。
本病与非洲猪瘟不同。非洲猪瘟在中国迄今尚未发现。
本病在自然条件下只感染猪，不同年龄、性别、品种的猪和野猪都易感，一年四季均可发生。病猪是主要传染源，病猪排泄物和分泌物，病死猪和脏器及尸体、急宰病猪的血、肉、内脏、废水、废料污染的饲料，饮水都可散播病毒，猪瘟的传播主要通过接触，经消化道感染。此外，患病和弱毒株感染的母猪也可以经胎盘垂直感染胎儿，产生弱仔猪、死胎、木乃伊胎等。
一般为5—7天，根据临床症状可分为最急性、急性、慢性和温和型四种类型。
A：最急性型：病猪常无明显症状，突然死亡，一般出现在初发病地区和流行初期。
B：急性型：病猪精神差，发热，体温在40—42℃之间，呈现稽留热，喜卧、弓背、寒颤及行走摇晃。食欲减退或废绝，喜欢饮水，有的发生呕吐。结膜发炎，流脓性分泌物，将上下眼睑粘住，不能张开，鼻流脓性鼻液。初期便秘，干硬的粪球表面附有大量白色的肠粘液，后期腹泻，粪便恶臭，带有粘液或血液，病猪的鼻端、耳后根、腹部及四肢内侧的皮肤及齿龈、唇内、肛门等处粘膜出现针尖状出血点，指压不退色，腹股沟淋巴结肿大。公猪包皮发炎，阴鞘积尿，用手挤压时有恶臭浑浊液体射出。小猪可出现神经症状，表现磨牙、后退、转圈、强直、侧卧及游泳状，甚至昏迷等。
C：慢性型：多由急性型转变而来，体温时高时低，食欲不振，便秘与腹泻交替出现，逐渐消瘦、贫血，衰弱，被毛粗乱，行走时两后肢摇晃无力，行走不稳。有些病猪的耳尖、尾端和四肢下部成蓝紫色或坏死、脱落，病程可长达一个月以上，最后衰弱死亡，死亡率极高。
D：温和型：又称非典型，主要发生较多的是断奶后的仔猪及架子猪，表现症状轻微，不典型，病情缓和，病理变化不明显，病程较长体温稽留在40℃左右，皮肤无出血小点，但有淤血和坏死，食欲时好时坏，粪便时干时稀，病猪十分瘦弱，致死率较高，也有耐过的，但生长发育严重受阻。
全身皮肤、浆膜、粘膜和内脏器官有不同程度的出血。全身淋巴结肿胀，
多汁、充血、出血、外表呈现紫黑色，切面如大理石状，肾脏色淡，皮质有针尖至小米状的出血点，脾脏有梗寒，以边缘多见，呈色黑小紫块，喉头粘膜及扁桃体出血。膀胱粘膜有散在的出血点。胃、肠粘膜呈卡他性炎症。大肠的回盲瓣处形成纽扣状溃疡。
主要表现为坏死性肠炎，全身性出血变化不明显，由于钙磷代谢的扰乱，
断奶病猪可见肋骨末端和软骨组织变界处，因骨化障碍而形成的黄色骨化线。
实验室诊断
在口述诊断的基础上，可用免疫荧光抗体检查，酶标记组织抗
原定位法，免体交互免疫试验，血清中和试验，猪瘟单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验等方法之一进行确诊。
预防：A、免疫接种。B、开展免疫监测，采用酶联免疫吸附试验或正向间
接血凝试验等方法开展免疫抗体监测。C、及时淘汰隐性感染带毒种猪。D、坚持自繁自养，全进全出的饲养管理制度。E、做好猪场、猪舍的隔离、卫生、消毒和杀虫工作，减少猪瘟病毒的侵入。
A、立即报告，及时诊断。B、划定疫点。C、封锁疫点、疫区。D、处理病猪，做出无害化处理。E、紧急预防接种。疫区里的假定健康猪和受威胁地区的生猪即接种猪瘟免弱毒疫苗。F、消毒，认真消毒被污染的场地、圈舍、用具等，粪便堆积发酵、无害化处理猪瘟（hogcholera，HC或SWliqefever，sF)
猪瘟是一种传染性非常强的传染病，常给养猪业造成毁灭性损失。预防猪瘟最有效的方法就是接种猪瘟疫苗。为了使广大养猪户正确选择和有效使用猪瘟疫苗，这里将猪瘟疫苗的种类和使用方法简介如下：　　疫苗的种类
目前市场上预防猪瘟的疫苗主要有以下三种：
1.猪瘟活疫苗（I）———乳兔苗。
2.猪瘟活疫苗（II）———细胞苗。
3.猪瘟活疫苗（I）———淋脾苗。
猪瘟活疫苗（I）———乳兔苗的用法该疫苗为肌肉或皮下注射。使用时按瓶签注明头份用无菌生理盐水按每头份1毫升稀释，大小猪均为1毫升。该疫苗禁止与菌苗同时注射。注射本苗后可能有少数猪在1天-2天内发生反应，但3日后即可恢复正常。注苗后如出现过敏反应，应及时注射抗过敏药物，如肾上腺素等。该疫苗要在-15℃以下避光保存，有效期为12个月。该疫苗稀释后，应放在冷藏容器内，严禁结冰，如气温在15℃以下，6小时内要用完；如气温在15℃-27℃，应在3小时内用完。注射的时间最好是进食后2小时或进食前。
猪瘟活疫苗（II）———细胞苗的用法该疫苗大小猪都可使用。按标签注明头份，每头份加入无菌生理盐水1毫升稀释后，大小猪均皮下或肌肉注射1毫升。注射4天后即可产生免疫力，注射后免疫期可达12个月。该疫苗宜在-15℃以下保存，有效期为18个月。注射前应了解当地确无疫病流行。随用随稀释，稀释后的疫苗应放冷暗处，并限2小时内用完。断奶前仔猪可接种4头份疫苗，以防母源抗体干扰。
猪瘟活疫苗（I）———淋脾苗的用法该疫苗为肌肉或皮下注射。使用时按瓶签注明头份用无菌生理盐水按每头份1毫升稀释，大小猪均1毫升。该疫苗应在-15℃以下避光保存，有效期为12个月。疫苗稀释后，应放在冷藏容器内，严禁结冰。如气温在15℃以下，6小时内用完。如气温在15℃-27℃，则应在3小时内用完。注射的时间最好是进食后2小时或进食前。
以上三种疫苗在没有猪瘟流行的地区，断奶后无母源抗体的仔猪，注射1次即可。
在有疫情威胁时，仔猪可在21日龄-30日龄和65日龄左右各注射1次。
被注射疫苗的猪必须健康无病，如猪体质瘦弱、有病，体温升高或食欲不振等均不应注射。
注射免疫用各种工具，须在用前消毒。每注射1头猪，必须更换一次煮沸消毒过的针头，严禁打“飞针”。
注射部位应先剪毛，然后用碘酒消毒，再进行注射。
以上三种疫苗如果在有猪瘟发生的地区使用，必须由兽医严格指导，注射后防疫人员应在1周内进行逐日观察。
在欧洲称为古典猪瘟{classicalswinefever．CSF），是由猪瘟病毒（HCV或CSFV)引起的一种高度接触性传染病，猪是该病毒唯一的自然宿主。于1833年首次发现于美国俄亥俄州，百余年来其流行遍及全球。国际兽疫局将其定为A类传染病，中国《动物防疫法》将其列为一类传染病．是目前危害中国养猪业发展的主要疫病之一。中国猪瘟兔化弱毒疫苗在防治猪瘟中曾起到决定性作用，但近几年来出现免疫效果不理想．应用组织培养弱毒苗也发生免疫失败，究其原因比较多。由于猪瘟造成的经济损失巨大．历来是各国研究的热点。
csFV基因结构与功能的研究
CSFV为有囊膜病毒，40--60nm，单股正链RNA。CSFV基因组长约123kb，仅含有一个大的开放性阅读框架（ORF）．此ORF翻译成含3898个氨基酸残基．分子量约438kDa的多聚蛋白，并进一步在病毒和宿主细胞蛋白酶的作用下加工为成熟蛋白．cSFV的所有结构蛋白和非结构蛋白均由该ORF所编码。ORF两侧是5’一端非翻译区（5’-UTR）和3’一端非翻译区（3’-UTR）．且5’一端无帽子结构．3’一端无poly(A）尾巴。这一大前体蛋白以共翻译和后翻译的形式在细胞蛋白酶和病毒特异蛋白酶作用下．加工成结构蛋白和非结构蛋白，其结构蛋白和非结构蛋白在病毒RNA上的编码顺序为Npro、c、Erns(E0）、E1、E2、P7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B。NS2-3可被加工成NS2、NS3(P80），除c、E0、E1和E2为结构蛋白外．其余均为非结构蛋白。
目前已经定位的CSFV蛋白有5种，即Npro、c、Erns(E0）、E1和E2．它们均由CSFV的RNA-ORF5’一端所编码。在结构蛋白中，最具有免疫防制研究价值的是EO和E2。
1.1c，是病毒的衣壳蛋白，也称p14，由病毒ORF中的Setl69～Ala267组成．是CSFV核衣壳蛋白其N端由CSFV非结构蛋白p23的水解作用产生，c端可能是由宿主细胞的信号肽酶作用所致。
1．2gp44/48，是病毒的一种囊膜糖蛋白．也称Erns．旧称E0。有9个可能的糖基化位点，去糖基的蛋白骨架分子量约26KDa，由病毒ORF中Glu168-Ala494组成。在感染细胞中gp44/48在内质网内积累，并可存在于细胞膜表面或被分泌到胞外。在病毒粒子中gp44/48以97KDa的同源二聚体形式存在于囊膜表面。由于其分子内缺乏疏水的膜锚定区，与病毒囊膜结合力弱．易从囊膜上游离下来。gp44/48可诱导产生猪瘟的中和抗体．免疫猪可诱导产生对致死量CSFV的保护性免疫。由于编码gp44/48的核酸序列在属内比编码gp55的序列保守程度高，因此Erns可作为防治猪瘟的一种靶蛋白。
Erns具有RNase活性，作用于单链的RNA．且对富含u的序列活性最高。4ng的Ems在体外即可将CSFV基因组RNA完全降解。推测Ems没有将其自身RNA降解掉的原因可能是由于空间上的隔离。在宿主细胞中，新合成的Erns在内质网腔内．而其基因组RNA则在胞浆中：在病毒粒子中，定位于囊膜的Ems与其基因组RNA间隔着衣壳蛋白．因此Erns是不会降解其自身RNA的。编码Ems的基因是瘟病毒属病毒所特有的．黄病毒科中其他病毒基因组内无此基因．推测该基因是病毒与宿主细胞的RNase基因重组得到的。
1.3gp33，是CSFV囊膜糖蛋白．也称E1，去糖基的蛋白骨架分子量21．8KDa．由195个氨基酸残基（ORF编码的Leu495至GlY68。组成，内有3个可能的糖基化位点。其蛋白骨架中有两段疏水序列（Leu548～Pro579～Gly689）。在多聚蛋白转位过程中，前一段是E1向内质网腔转位的终止信号，后一段则充当E2转位的信号肽，除此之外，这二段疏水区还充当E1的膜锚定位点。E1在病毒囊膜内．不能诱导猪产生抗体。
1.4gp55．为CSFV的另一囊膜糖蛋白，又称为E2，是病毒主要的抗原蛋白，也是三个病毒糖蛋白中保守性最低．最易变异的分子。gp55常以100kDa的同源二聚体及与gp33形成75kDa的异源二聚体形式存在于病毒粒子及CSFV感染的细胞表面。在体外gp55可诱导产生病毒的中和抗体，体内可诱导产生抗CSFV的攻击的抗体。Hulst用20μg昆曳细胞表达的E2双相油包水乳剂免疫猪，能抵抗100LD50CSFVBrescia毒株强毒的攻击。gp55的蛋白骨架由370个氨基酸（ORF编码的690-1060氨基酸残基）组成．并以其c端的40个疏水氨基酸锚定在膜上。由于糖基化程度不同。E2的分子量可为51-58kDa。E2分子内的15个Cys残基在属内均保守，其中N端6个Cys残基参与抗原结构域的形成，c端9个Cys残基则参与同源、异源二聚体的形成。
gp55的抗原决定区在其N端部分（ORF编码的第690-866氨基酸），可分为2个独立的抗原结构单元，四个抗原结构域A．B．C，D。其中结构域A又可分为A．，A2，A3三个亚域。结构域B．c属于一个结构单元．均为中和抗体的结合位点．由ORF编码的690～800氨基酸残基参与构成。Cys693与CYS7377形成的二硫键对结构域B、c的空间结构至关重要。另一个结构单元含A．D抗原结构域。A1、A2亚区定位于第795-851氨基酸残基，在种内保守A1是一个抗体的中和位点。亚区A3定位于766-813氨基酸残基．而氨基酸残基766-800则参与了结构域D的构成。cys792～Cys856及Cys818～Cys828间的二硫键对这个结构单元空问结构的形成是必需的。连接这两个结构单元的是一段属内保守的疏水序列．推测这段序列参与了病毒侵入细胞过程中的膜融合过程。
1.5Npro，也称p23，CSFV的非结构蛋白，是ORF编码的多聚蛋白N端的第一个蛋白质。Npro由168个氨基酸组成．具有蛋白质水解酶活性，能以自催化的方式从正在翻译的多聚蛋白上断裂下来，成为成熟的病毒蛋白。序列比较发现，编码p23的基因在瘟病毒属中是较为保守的。它的断裂位点在Cysl68与其下游的病毒核衣壳p14N端第一个氨基酸ser。间。Npro的cys69和His130可能位于其酶活性中心．能水解断裂Cys与Ala及Gly与Ser间的肽键，断列位点位于活性His残基下游38个氨基酸残基处。Npro不参与CSFV的结构及非结构蛋白的加工过程．其蛋白酶活性在cSFV增殖过程中的作用还不清楚。Rumenapf等人使用定点突变技术对参与Npro催化活性的氨基酸残基进行测定．确定了其中的GIu22、His49和Cys69是保持Npro蛋白酶活性所必需的氨基酸残基，而His130并非必须。
实验窒诊断
目前猪瘟流行常常表现无规律的地区性散发．发病特征不典型，以发热、精神沉郁、食欲减退、咳嗽、共济失调、结膜炎以及腹泻、围产期死亡、死胎、流产。中等毒力及强毒感染有以上这些症状，并且在猪群中不分年龄快速传播。结合这些临床症状进行实验室诊断是必要的。
2.1病毒抗原的检测猪瘟病毒抗原的快速检测对于猪瘟的诊断具有特别重要的意义。目前快速、敏感的检测方法是利用免疫组化技术检测扁桃体组织。扁桃体中猪瘟病毒抗原可早在感染后2d检测到．淋巴结、脾脏以及胰腺均可作为病毒早期检测的组织样品。DelasMulas等及Narita等报道了一种检测猪瘟病毒抗原的免疫组化方法．即利用针对E2糖蛋白的单克隆抗体检测福尔马林固定、石蜡包埋的组织样品的免疫组化方法。该方法的优点是能检测长期保存的样品，缺点是较费时．而且福尔马林固定后的组织不能再进行病毒分离。利用链酶一生物素一过氧化物酶（ABc）的免疫组化方法也能用于猪瘟病毒组织切片上抗原的检测。据报道流式细胞仪也可进行血样中猪瘟病毒的检测，但其敏感性较低。以猪瘟强毒感染仔猪，利用抗原捕获ELISA方法检测其病毒血症，结果表明该方法可用于猪群中流行病学的调查。但其敏感性以及特异性均低于传统的实验室方法。
2.2感染性病毒的检测病毒分离是目前体外检测感染性猪瘟病毒最特异的方法。已报道有几种方法可以从组织、全血中分离病毒，白细胞是分离病毒的最佳样品。然而一些研究人员发现，白细胞以及单核细胞在动物感染后较长时间才能感染病毒。因此，对于猪瘟的早期诊断．全血或血浆可能比白细胞更为敏感。最常用于猪瘟病毒分离的细胞为猪肾细胞（PKl5或SK6）或猪睾丸细胞（sT）。日本建立了一种猪肾由来的传代细胞系（FS-L3）．FS-L3细胞在不感染病毒的情况下呈大园球状．数倍至数十倍于普通细胞．但一旦感染了猪瘟病毒，FS-L3细胞的大园球状即消失．这一特性已被用作猪瘟病毒的中和试验等各种生物学特性的测定。经研究发现，产生细胞病变的毒株是因为它的遗传基因发生了变化。从5’末端的第一个核苷酸到4764个核苷酸均已缺失．其中包括5’末端的非编码区、自身蛋白分解酶、衣壳蛋白、糖蛋白（E0、E1、E2）、非结构蛋白NS-1、和NS-2的基因均已缺失。
2.3猪瘟病毒基因组检测已报道利用RT-PCR方法检测猪瘟病毒RNA有数种程序。瘟病毒属特异的引物多选自基因组的5’端保守区．其最突出的优点是其产物能用来直接测序，直接进行病毒株的分型。一般来说套式RT-PCR方法是检测猪瘟病毒更敏感的方法，但其缺点是比较费时．不适用于大量样品的检测。McGoldrick等报道了一种检测猪瘟病毒的单管荧光RT-PCR方法。此方法可检测出仔猪血样中感染了中等毒力或高等毒力的猪瘟病毒，其敏感性高于病毒分离方法．并且简化了试验程序．减少了污染的风险．还可进行大量样品的检测。
2.4抗体检测最常用的检测猪瘟病毒抗体的方法多以病毒中和试验为基础。目前已建立数个特异的检测血清抗体的ELlSA方法．包括检测针对粗蛋白、特异结构蛋白如E2、Erns以及非结构蛋白NS3抗体的方法。目前使用最广泛的是CSFVE2ELISA，其敏感性与VNT相比为90%～99%．特异性为99%。Leforban等建立了一种ELISA方法，能够区分BVDV、BDV以及CSFV抗体。这个方法对于BVDV/BDV高流行地区（如荷兰)csF的检测非常有意义。ELISA特异性与敏感性的提高是目前面临的最大的挑战。
当前，猪瘟仍是世界养猪业的一大威胁．年期间在德国、荷兰、西班牙和意大利等国都曾多次暴发了猪瘟，在中国CSFV的持续性感染和疫苗保护效力下降的现象也比较普遍，这不仅给养猪业造成了严重的经济损失，而且也给猪瘟防治政策的制定带来了一定的困难。不过，相信随着CSFV分子生物学和检测方法研究的进一步深入，这些问题都会得到最终解决。
您可能关心的页面： 、 、 、
以上新闻文章、知识、名人、名人访谈源于"CNPP新闻搜索引擎自动分类排列收录和展示"或"由企业/经销商/分公司/用户自行提供"，买购网不进行任何文章采集刊登和转载，版权属于原网站，与买购网无关。
建议登录CNPP系统后提交方便管理修改！
所属行业：
相关行业：
按条件查看：
按商城(推荐购物网站)查看：
按模块筛选：
知识大讲堂：
使用兽药的基本原则有哪些？1、防重于治。2、对症下药。3、适度剂量。4、合理疗程。5、正确给药。只有...
广东省通信管理局当前位置：&>&
非洲猪瘟病毒检测方法研究进展
&&& 非洲猪瘟（Ａｆｒｉｃａｎ　ｓｗｉｎｅ　ｆｅｖｅｒ，ＡＳＦ）是由非洲猪瘟病毒（Ａｆｒｉｃａｎ　ｓｗｉｎｅ　ｆｅｖｅｒ　ｖｉｒｕｓ，ＡＳＦＶ）引起猪的一种急性、发热性、高度接触传染性疾病［１］，临床症状类似于经典猪瘟（Ｃｌａｓｓｉｃａｌ　ｓｗｉｎｅ　ｆｅｖｅｒ，ＣＳＦ），主要特征表现为高热、呕吐、皮肤发绀、内脏器官广泛性出血、呼吸障碍、流产及神经系统功能改变等。ＡＳＦ于１９２１年在非洲肯尼亚被首次发现，目前已流行至非洲、欧洲和美洲等数１０个国家和地区，且仍有不断蔓延的趋势。该病传染性强、发病快、病程短、病死率高达１００％，对养猪业危害极大，该病被世界动物卫生组织（ＯＩＥ）列为必须及时通报的动物疫病，被我国农业部列为一类动物疫病。目前，该病的防控缺乏行之有效的疫苗和治疗药物，综合防控面临着巨大挑战。在我国虽未发现该病，但其从西非至东非、欧洲、亚洲的传播态势已经形成，对我国养猪业的潜在威胁日益增大，一旦侵入我国，将会给我国养猪业带来极大的危害，并对养猪相关产业造成巨大冲击。只有建立快速、准确、灵敏和特异的ＡＳＦＶ检测方法，才能更好地进行检疫，严防该病传入我国，故加强该病快速诊断技术的研究贮备工作具有重大的现实意义。论文就非洲猪瘟病毒各种实验室检测技术优缺点进行全面论述，旨在为我国开展非洲猪瘟的监测提供技术参考。
１　ＰＣＲ及多重ＰＣＲ方法&&& ＰＣＲ方法操作简单、检测快速、灵敏度高、特异性强，是实验室常用的分子生物学诊断技术，也是目前ＡＳＦＶ较常用的实验室诊断方法。多重ＰＣＲ方法是在同一个ＰＣＲ反应体系中加入多对特异性检测引物，同时对多个靶基因进行快速扩增，其可以实现ＡＳＦＶ与其他病原体的快速鉴别诊断。Ａｇｕｅｒｏ　Ｍ等［８］和曾少灵等［９］均先后建立了ＡＳＦＶ的ＰＣＲ检测方法，均具有良好的敏感性和特异性，可以检测出极低含量的ＡＳＦＶ，为ＡＳＦＶ早期感染的快速诊断提供了有效的分子生物学检测方法。杨霞等［１０］利用ＰＣＲ方法对河南省不同地市２７个猪场所采集的疑似病料进行了ＡＳＦＶ的核酸检测，阳性检出为０，表明中国河南地区没有ＡＳＦＶ的感染与流行。ＰＣＲ方法操作简单、检测快速、敏感性高、特异性强，适合普通实验室进行ＡＳＦＶ的检测工作，对实现ＡＳＦＶ早期排查具有重要意义。Ａｇｕｅｒｏ　Ｍ等［１１］和张倩等［１２］分别建立了检测ＡＳＦＶ和ＣＳＦＶ的双重ＰＣＲ方法，Ａｇｕｅｒｏ　Ｍ等建立的方法从临床样品处理至检测结束整个过程在５ｈ内即可完成，张倩等建立的方法检测猪圆环病毒２型、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒均为阴性，对ＣＳＦＶ和ＡＳＦＶ的最低检出量均可以达到１００ｐｇ，对山东聊城地区５８份样品进行检测，ＣＳＦＶ阳性１５份，ＡＳＦＶ阳性０份。多重ＰＣＲ方法可在同一个体系中同时对多个目的基因进行扩增，并且检测所耗时间与常规ＰＣＲ方法相当，同样适合于普通实验室，为ＡＳＦＶ和ＣＳＦＶ的临床鉴别诊断和流行病学调查等研究提供了有效的技术支持。
２　荧光定量ＰＣＲ及多重荧光定量ＰＣＲ方法&&&& 实时荧光定量ＰＣＲ（ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ－ＰＣＲ，ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ｑＰＣＲ）是融汇了ＰＣＲ技术和光谱技术的一种核酸定量检测技术，具有敏感性高、特异性强、重复性好、全封闭反应、定量准确等优点，与常规ＲＴ－ＰＣＲ检测方法相比，解决了ＰＣＲ假阳性和溴化乙锭对环境的污染问题，且可以实现定量检测。多重荧光定量ＰＣＲ方法是在同一个荧光定量ＰＣＲ反应体系中加入多对特异性检测引物，进而多种病原体的鉴别诊断。&&& Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ　Ｐｉｎｅｒｏ　Ｊ等［１３］利用通用探针库建立了ＡＳＦＶ的实时荧光定量ＰＣＲ检测方法，实现了ＡＳＦＶ感染的定量检测和鉴定。黄萍等［１４］和郭少平等［１５］分别针对ＡＳＦＶ　ｐ７２基因和Ｋ２０５Ｒ基因设计特异性检测引物和探针，均建立了ＡＳＦＶ实时荧光定量ＰＣＲ检测方法，其敏感性可达１００个拷贝。实时荧光定量ＰＣＲ检测方法敏感性高、特异性强，可同时快速检测大批量样品，且整个反应在密闭条件下进行，相对不易产生分子污染，可作为ＡＳＦＶ的诊断、检疫、食品安全检验和ＡＳＦＶ分子生物学研究的一种定量检测方法。&&& Ｈａｉｎｅｓ　Ｆ　Ｊ等和陈静静等分别建立了可以同时检测ＣＳＦＶ和ＡＳＦＶ的荧光定量ＰＣＲ鉴别检测方法，检测口蹄疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪水疱病病毒、猪圆环病毒２型均为阴性，灵敏度可以达到１０拷贝的数量级，对２份已知ＣＳＦＶ阳性血清样品和１２０份猪内脏、猪鼻腔拭子及血清样品进行检测，阳性样品的检测结果均为阳性，未知样品检出ＣＳＦＶ　３份阳性，未检出ＡＳＦＶ阳性。ＣＳＦＶ和ＡＳＦＶ双重荧光定量ＰＣＲ鉴别检测方法，只需一步操作即可完成ＣＳＦＶ和ＡＳＦＶ的鉴别诊断，且敏感性比常规的ＣＳＦＶ和ＡＳＦＶ双重ＰＣＲ鉴别检测方法要高，适用于ＡＳＦＶ和ＣＳＦＶ的临床快速鉴别诊断和定量检测。
３　环介导等温扩增技术&&& 环介导等温扩增技术（ｌｏｏｐ－ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｉｓｏｔｈｅｒ－ｍａｌ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＬＡＭＰ）是一种新兴的核酸扩增技术，可以实现等温条件下的核酸快速扩增，该方法操作简单、灵敏、快速，且不需要特殊仪器设备，具有较高的临床实用性。Ｊａｍｅｓ　Ｈ　Ｅ等［１８］和江彦增等均建立了快速、高效检测ＡＳＦＶ的ＬＡＭＰ方法，该方法在恒温水浴锅中进行，３０ｍｉｎ即可得到结果，灵敏度是常规ＰＣＲ方法的１００倍以上，非常适合在野外现场或缺乏试验条件的边远地区检测ＡＳ－ＦＶ。杨吉飞等［２０］利用建立的ＡＳＦＶ的ＬＡＭＰ方法对非洲猪瘟参考实验室提供的ＡＳＦＶ　１７个毒株的基因组以及国内收集的５０份猪的基因组、３０份蜱的基因组进行检测，结果显示ＬＡＭＰ方法能够成功扩增非洲猪瘟病毒１７个毒株的基因组，而野外收集的猪和蜱的基因组检测均为阴性。ＬＡＭＰ检测方法不需要ＰＣＲ中的变性、退火步骤即可进行靶序列的循环扩增，不但大大缩短了时间，且使反应能够在恒温条件下进行，无需特殊仪器设备，肉眼判读，可以满足基层快速诊断的需要，非常适合于基层兽医实验室和养殖场使用。
４　探针杂交技术&&& 探针技术是用探针标记已知核酸序列，通过检测标记探针信号而分析核酸含量，进而可用于特定基因序列的检测。张鑫宇等［２１］针对ＡＳＦＶ　ｐ７２基因分别设计合成１条与保守区域互补的５′生物素标记及３′烷巯基修饰短链寡核苷酸探针，并将烷巯基修饰的探针吸附到纳米金颗粒上，制备纳米金标记探针，将ＰＣＲ扩增产物与生物素探针及纳米金标记探针进行杂交，杂交产物加入吸附链霉亲和素的酶标板，利用亲和原理，捕获杂交产物，银染增强法对纳米金标记探针进行信号放大，进而建立了检测ＡＳＦＶ　ｐ７２基因的纳米金探针杂交方法。该方法中纳米金探针经银染放大后，在酶标板中形成肉眼可见的黑色沉淀，可有效检测扩增出核酸浓度达到１０ｆｍｏｌ／Ｌ　ｐ７２基因，可用于ＡＳＦＶ快速检测。探针技术检测灵敏度高，同时能有效排除ＰＣＲ检测过程中的非特异性结果，省去了琼脂糖凝胶电泳步骤，操作简便、检测迅速，在酶标板中可以批量反应，为ＡＳＦＶ核酸检测方法研究开辟了新的途径，但该方法的建立难度较高，操作较繁琐，对试验人员技术水平要求较高。
５　ＥＬＩＳＡ方法&&& 酶联免疫吸附试验（ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｓｏｒ－ｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ，ＥＬＩＳＡ）是继免疫荧光和放射性同位素免疫技术之后发展起来的一种新型的免疫酶技术，具有检测快速、操作简单、无辐射、价格低廉等优点，是当前动物疫病诊断与流行病学调查广泛采用的免疫学诊断技术。Ｐｅｒｅｚ　Ｆｉｌｇｕｅｉｒａ　Ｄ　Ｍ等［２２］以昆虫细胞表达的ｐ３０重组蛋白为包被抗原，建立了检测ＡＳＦＶ抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法，通过对采自西班牙和不同非洲地区的６７２份猪血清样品进行检测表明，间接ＥＬＩＳＡ方法敏感性高，可检测到ＡＳＦＶ早期感染的样品，可用于ＡＳＦＶ特异性抗体的早期检测。董志珍等利用基因重组技术制备非洲猪瘟ｐ５４蛋白，将其免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，将免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，采用有限稀释法进行克隆，获得一株能稳定分泌抗ＡＳＦＶ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，使用该单克隆抗体建立了检测猪血清中ＡＳＦＶ抗体的竞争ＥＬＩＳＡ方法，该方法灵敏度高于间接免疫荧光方法，可用于猪血清的ＡＳＦＶ抗体检测。曾少灵等利用杆状病毒表达载体成功表达了ＡＳＦＶ　ＶＰ７３蛋白，表达的重组蛋白具有良好的特异性与反应性，以此重组蛋白作为检测抗原，建立了检测ＡＳＦＶ血清抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法。张倩等［２５］采用瑞典ＳＶＡＮＯＶＡ非洲猪瘟间接ＥＬＩＳＡ抗体检测试剂盒对辽宁绥靖、内蒙古赤峰、大连东港共计９２份猪血清进行了ＡＳＦＶ抗体的检测，结果全部为阴性。ＥＬＩＳＡ方法高通量、快速、简单、敏感、特异、无污染，非常适用于基层兽医部门进行大批量样品检测和大规模流行病学调查。
６　小结&&& 非洲猪瘟在我国尚未发现，是我国进出口贸易中监测的重要疫病，必须保持高度警惕，防止该病入境。近年来，随着国际贸易、现代物流的飞速发展、世界经济的全球化、自然生态环境的改变，ＡＳＦＶ从西非至东非、欧洲、亚洲传播的态势已经形成，传入我国的风险加剧，加强该病诊断技术的研究贮备工作具有重要意义。目前，针对ＡＳＦＶ的检测技术主要有针对病毒核酸检测技术和基于病毒抗原／抗体反应的免疫学技术。用免疫学方法检测抗体可以了解ＡＳＦＶ感染、发生、发展的进程，但抗体只有在病毒感染至一定时期后才会出现，故ＥＬＩＳＡ等抗体检测方法存在一定的局限性。ＰＣＲ、荧光定量ＰＣＲ、ＬＡＭＰ等分子生物学技术在猪感染ＡＳＦＶＶ的早期即可检测到病毒核酸，在ＡＳＦＶ的早期检测中具有重要作用。其中ＰＣＲ方法操作简单、灵敏度高、重复性好，需要一定的仪器设备和试剂，适合一般实验室使用。荧光定量ＰＣＲ方法将ＰＣＲ与荧光检测结合起来，克服了常规ＰＣＲ易污染、扩增后需电泳检测等缺点，并可对病毒核酸进行准确定量，且检测灵敏度比常规ＰＣＲ方法更高，但荧光定量ＰＣＲ方法对操作人员、仪器设备与试剂要求较高，一般实验室很难具备试验条件，难以普及应用。ＬＡＭＰ方法肉眼判读、操作简单、不需要特殊仪器设备，特别适合于基层兽医实验室和养殖场应用。总之，ＡＳＦＶ的实验室检测方法各有优缺点，但对各种方法的检测结果均要求准确、快速、敏感，以便采取及时、有效的防控措施。相信随着分子生物学与免疫学技术的不断发展，ＡＳＦＶ实验室诊断方法必将会不断完善，进一步为我国开展非洲猪瘟的监测与综合防控提供技术支持。
如果您认为本网转载的内容涉及侵权，请作品的作者联系网站下方的编辑qq
牧通人才网微信公众号