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PROE安装问题
那一步出了问题
警告：在指定的位置未检测到FLEXnet许可证。请验证指定的文件是一个许可文件。
我这里选的择的是第三种方式调取许可证文件，就是出现这样的问题，按说不应该啊，以前都是这样安装的啊，请高手指点！！谢谢
有没有在license.dat里面把你的网卡号，给全部替换掉。是否保存？
名称的文件夹中
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[求助]取血浆后,PBMC分离,请大家看问题出在哪一步
查看完整版本请点击这里：
1 .肝素抗凝血5ml(从病房抽血,已密封静置了快2个小时).
全血离心2200转,8min
2 .取血浆2ml,余下3ml血中加入2ml hanks液,混匀重新悬成5ml稀释血
3.将此5ml稀释血逐滴加入淋巴细胞分离液6ml中,加的过程分层明显,
少量红细胞下沉.
4. 离心2000转,20min,白环层不明显,多量的颗粒层浮在红细胞层表面,淋巴细胞分离液层不少云絮状沉淀物.
5.取白环层洗涤计数,约1*10e5,损失了绝大多数PBMC.
试剂都复温了,避光冷藏保存,无菌操作.以前无菌台边抽血做,成功过很多次.
请大家帮忙看看,是什么问题.查看完整版本请点击这里：
summerxx ( 13:05:21)
1.我用全血离心,是因为我要血浆做其他实验
2.稀释血往分离液上加的时候,操作及时,离心也及时,RBC每次都有少量下沉,以前都不影响结果.
3.云絮状悬物不知道是什么
yapuyapu ( 13:05:40)
絮状物很有可能是死细胞，死细胞通常会粘附甚而包裹更多的细胞形成絮状。
1、如果同时想要PBMC和血浆的话，建议降低首次离心速度，减少对细胞的损伤，而血浆量的损失其实很少。如果担心血浆中还有细胞成分，可以将血浆再次高速离心取上清。2200转对于处在两层液面之间的细胞没问题，但对于压在管底的细胞来说太高了，可以尝试800－1000rpm。
2、首次离心将血浆取出后，要加入至少相当于原总全血量的Hank's液稀释（即至少5mL)，因为细胞浓度越大越不利于不同密度细胞之间的分离，一般来讲稀释倍数多一些，管截面大一些分离效果更好。而分离液的量没必要那么多，是上层总液体量的一半就可以了。
04906 ( 13:06:10)
牛人...呵呵
800-1000的速度能离心开不?
我的意思是担心细胞没完全降下去,以前在无菌台边抽血时,离心转速用2000,吸血浆时细胞容易浑,损失PBMC .
不过静置2小时的全血,分层已大致出来了.
离心的管截面,我都是用的15ml离心管,因为据说15会比50 的离心效果好.
lixi559 ( 13:06:29)
以前我从医院抽取肝炎病人的外周血分离PBMC,也遇到过这种情况,其实,这并不是操作的问题,和病人的状况有关,如果他的血液中有很多的脂肪颗粒,很可能就会出现你的这种情况,另外,病人的PBMC可能也会比较少,有一次,我抽的病情比较严重的病人10ml血,还得不到1million的细胞,而且用CONA去刺激的话也不会分泌细胞因子.我个人认为,操作没错,只是个体差异而已.
04906 ( 13:06:48)
个体差异......那就只能算我不走运了.
04906 ( 13:07:15)
2200转对于处在两层液面之间的细胞没问题，但对于压在管底的细胞来说太高了，可以尝试800－1000rpm。
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我刚在想,有必要再重新吹匀全血不?PBMC会不会沉下去了.
rxcc33 ( 13:07:44)
建议用EDTA-钾盐管抗凝
离心速度可适当增大,2500转/分也可以.
患者的情况也比较重要.SLE患者的分离效果尤其差.
或者更换淋巴细胞分离液.
u234 ( 13:08:11)
我刚在想,有必要再重新吹匀全血不?PBMC会不会沉下去了.
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加入Hank's后（我们是用PBS）当然要重新将细胞吹匀了。
当然有些病人的血液状态确实会导致分离效果不理想，找个正常人的血做对照试一下就知道了。
但你的操作确实有可改进之处，我的建议有益无害。我们平时离心活细胞经常1000rpm，除了血小板基本都离得下来（你想想，即使不离心静置一段时间血浆都已经很清澈了）。所以你取血浆后可再高速离心去除血小板。关于离心速度当然还要具体情况具体对待，分离PBMC取白膜层离心洗涤那次速度当然要高点，因为混有一些淋巴细胞分离液了。
15ml离心管只是白膜层看起来比较厚，视觉效果好一些，而50ml离心管白膜层显得薄一些，只要吸取得干净，我的经验是50ml离心管的总PBMC回收率更高。话说回来，如果血量比较少的时候用50ml离心管就有点浪费了。关于截面问题和稀释倍数问题是我在一本英文书上看到的，恰好也支持这一结果罢了。
肝素钠抗凝血保存的时间可长一些，我们有时时间安排不开放过夜再分离也没问题（室温），对PBMC功能影响小。但EDTAK2抗凝血要尽快分离，因为它可以鏊合钙离子，而钙离子是细胞的重要信号分子，对后续的细胞功能可能产生一定的影响。
04906 ( 13:08:29)
你的建议我会采用的
我说的吹匀全血是说第一次离心全血的时候,因为你说速度高的时候,管底的细胞会破裂,而在外面自然沉淀的时候,我担心有些PBMC已经沉淀到RBC下面去了.
第一次全血离心转速低的时候,,& 以前在无菌台边抽血时,离心转速用2000,吸血浆时细胞容易浑,损失PBMC & 但那是不静置的情况下的,下次有标本,我会再试试低速点.
抗凝我还是用肝素钠,因为我看的文献全部是肝素钠的,对细胞影响小.恰巧楼上的讲密封后保存时间可长,那是最好了,因为常常在实验室占不到台子.
baidukk ( 13:08:53)
我说的吹匀全血是说第一次离心全血的时候,因为你说速度高的时候,管底的细胞会破裂,而在外面自然沉淀的时候,我担心有些PBMC已经沉淀到RBC下面去了.
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那倒不必，因为在自然沉淀的情况下，也是红细胞沉降速度快。
最佳离心速度你可以根据实际情况摸索一下。
查看完整回复请点击这里：Copyright & 版权所有联系方式：9204258闽ICP备号-156答案：D解析：
请选择年级七年级八年级九年级请输入相应的习题集名称(选填)：
科目：初中语文
来源：点击新版全程测试卷初二（下）
阅读语段，回答问题：
　　①海底大体上是平坦的，平均深度是4000米。②也有峡谷和深渊，最深的地方达11000米。③山脉也不少，在大西洋有大西洋山脉，在印度洋有中央印度洋山脉，在北极有罗蒙诺索夫山脉。④不仅有一般的山脉，在太平洋还有海底火山。⑤海底的动物已经知道的大约有3万种。⑥它们的游动非常有趣。⑦海参爬行靠肌肉的收缩，每小时只能前进4米。⑧有一种鱼身体像梭子一样，在攻击其他动物时，每小时能游几十千米，比普通的火车还快。⑨乌贼和章鱼能把水从身体的漏斗管中迅速地喷出来，还能用水的反动力游泳。⑩还有一些贝类更妙了，它们附着在船底，作免费的长途旅行。(11)海底的“森林”和“草地”十分绚烂多彩，有褐色的，有淡紫色的，还有红色的。(12)这些海底植物，最小的凭肉眼不能看见。(13)有些大海藻却长达两三百米，是地球上最长的生物。(14)海底蕴藏着丰富的煤和石油，还有地球上很少的稀有金属。(15)产量最大的当然要数盐了，每一立方千米的海水里含有3000万吨食盐。(16)海洋真是地球上矿藏最丰富的大仓库。
1．用横线标出句中体现用语准确的词：
（1）海底大体上是平坦的。平均深度是4000米。
（2）海底的动物已经知道的大约有3万种。
（3）有些大海藻却长达两三百米，是地球上最长的生物。
（4）产量最大的当然要数盐了，每一立方千米的海水里含有3000万吨食盐。
2．海底的“森林”和“草地”十分绚烂多彩，有褐色的，有淡紫色的，还有红色的。指明句中引号的作用
A．表明行文中直接引用的话。
B．表示特定的称谓。
C．表示需用着重指出的部分。
D．表示讽刺和否定的意思。
3．对下列句子运用的说明方法判断错误的一项是
A．也有峡谷和深渊，最深的地方达11000米。（列数字）
B．乌贼和章鱼能把水从身体的漏斗管中迅速地喷出来，还能用水的反动力游泳。（举例子）
C．有一种鱼身体像梭子一样……（打比方）
D．有一种鱼……每小时能游几十千米，比普通的火车还快。（列数字、作比较）
E．还有一些贝类更妙了，它们附着在船底，作免费的长途旅行。（分类别）
4．用“|”为选文分层，并分别用四个字概括各层意：
分层：①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩(11)(12)(13)(14)(15)(16)
层意：第一层：　　第二层：　　第三层：　　第四层：
5．为选文加上一个恰当的标题是
A．海底的秘密B．漫话海底
C．海底世界D．海底生物
科目：初中语文
来源：素质教育新学案·语文·八年级·上册
阅读下列新闻片断，回答问题。
中英香港政权交接仪式在港隆重举行
　　①接着，江泽民主席走到镶嵌着中华人民共和国国徽的讲台前发表讲话。他说，中华人民共和国香港特别行政区正式成立，这是中华民族的盛事，也是世界和平与正义事业的胜利。日这一天，将作为值得人们永远纪念的日子载入史册。
　　②江泽民说，历史将会记住提出“一国两制”创造性构想的邓小平先生。我们正是按照“一国两制”伟大构想指明的方向，通过外交谈判成功地解决了香港问题，终于实现了香港回归祖国。
　　③江泽民向中英两国所有为解决香港问题作出贡献的人士，向世界上所有关心和支持香港回归的人们表示感谢，向回到祖国怀抱的六百多万香港同胞表示亲切问候和良好祝愿。
　　④江泽民说，香港回归后，中国政府将坚定不移地执行“一国两制”、“港人治港”、高度自治的基本方针，保持香港原有的社会、经济制度和生活方式不变，法律基本不变。
　　⑤他说，香港回归后，中央人民政府负责管理香港的外交事务和防务。香港特别行政区依据基本法享有行政管理权、立法权、独立的司法权和终审权。香港居民依法享有各项权利和自由。香港特别行政区将循序渐进地发展适合香港实际情况的民主制度。
　　⑥江泽民说，香港回归后，将继续保持自由港的地位，继续发挥国际金融、贸易、航运中心的作用，继续同各国各地区及有关国际组织发展经济文化关系。所有国家和地区在香港的正当经济利益将受到法律保护。他希望世界上一切在香港有投资与贸易利益的国家和地区，继续为促进香港的繁荣稳定作出努力。
　　⑦江泽民指出，香港今日的繁荣归根到底是香港同胞创造的，也是同祖国内地的发展和支持分不开的。他表示相信，有全国人民作坚强后盾，香港特别行政区政府和香港同胞一定能够管理和建设好香港，保持香港长期繁荣稳定，创造香港美好的未来。
　　⑧江泽民主席的讲话，激起全场6次长时间的热烈掌声。
1．文中江泽民主席的讲话，为什么不加引号？
____________________________________________________________________
2．第①⑦段若按内容划分，可以分为几个层次？请选出划分正确的一项
A．①②/③④⑤/⑥⑦B．①/②③/④⑤⑥/⑦
C．①/②③④⑤⑥/⑦D．①②/③④/⑤⑥/⑦
3．第④段加粗的句子中，“基本”一词能否删去？为什么？
____________________________________________________________________
4．第⑧段说，“6次长时间的热烈掌声”，为什么精确地说“6次”，而不说多次？
____________________________________________________________________
5．江泽民主席的讲话激起全场6次长时间的热烈掌声，请在文中至少找出三处会激起热烈掌声的句子。（在原文中用横线画出）
科目：初中语文
来源：山东省同步题
题型：阅读理解与欣赏
阅读理解下文，完成问题　　我们从古以来，就有埋头苦干的人，有拼命硬干的人，有为民请命的人，有舍身求法的人，……虽是等于为帝王将相作家谱的所谓“正史”，也往往掩不住他们的光耀，这就是中国的脊梁。　　这一类的人们，就是现在也何尝少呢？他们有确信，不自欺；他们在前仆后继的战斗，不过一面总在被摧残、被抹杀，消灭于黑暗中，不能为大家所知道罢了。说中国人（a）失掉了自信力，用以指一部分人则可，倘若加于全体，那简直是诬蔑。　　要论中国人（b），必须不被搽在表面的自欺欺人的脂粉所诓骗，却看看他的筋骨和脊梁。自信力的有无，状元宰相的文章不足为据的，要自己去看地底下。1．“正史”是加了引号的，这个引号的作用是_____________________2．这一类的人们，就是现在也何尝少呢？①这一类指代__________________________________________________②将“就是现在也何尝少呢？”改为陈述句。______________________3．在“这就是中国的脊梁”一句中，作为比喻，“脊梁”是________意思。“状元宰相”是指________。4．文中划线的ab两个“中国人”指代什么？请分别指出：a．中国人：________　b．中国人：________5．在这几段文字里，作者通过列举事实所确立的正面观点是“________”，所批驳的观点是________。6．指出敌论错误的根源在于（　　　）A．捏造事实B．以偏概全C．不明真相D．以小见大7．作者所写的，“这一类人们”的总的特点是________，作者用一个比喻句集中称赞他们的业绩和品格，这个句子是________。8．鲁迅的语言饱蘸感情。请选择恰当的分析项说明下列加粗词语分别表达出了作者怎样的思想感情。A．讽刺B．赞颂C．自豪D．愤慨①我们从古以来……（　　 ）②所谓“正史”（　　 ）③他们在前仆后继的战斗（　　 ）④那简直是诬蔑（　　 ）
科目：初中语文
来源：广东省模拟题
题型：阅读理解与欣赏
阅读，回答问题。
中国人失掉自信力了吗①鲁迅　　从公开的文字上看起来：两年以前，我们总自夸着“地大物博”，是事实；不久就不再自夸了，只希望着国联②，也是事实；现在是既不夸自己，也不信国联，改为一味求神拜佛③，怀古伤今了——却也是事实。　　　　于是有人慨叹曰：中国人失掉自信力了④。& 　　　　如果单据这一点现象而论，自信其实是早就失掉了的。先前信“地”，信“物”，后来信“国联”，都没有相信过“自己”。假使这也算一种“信”，那也只能说中国人曾经有过“他信力”，自从对国联失望之后，便把这他信力都失掉了。& 　　　　失掉了他信力，就会疑，一个转身，也许能够只相信了自己，倒是一条新生路，但不幸的是逐渐玄虚起来了。信“地”和“物”，还是切实的东西，国联就渺茫，不过这还可以令人不久就省悟到依赖它的不可靠。一到求神拜佛，可就玄虚之至了，有益或是有害，一时就找不出分明的结果来，它可以令人更长久的麻醉着自己。　　　　中国人现在是在发展着“自欺力”。& 　　　　“自欺”也并非现在的新东西，现在只不过日见其明显，笼罩了一切罢了。然而，在这笼罩之下，我们有并不失掉自信力的中国人在。& 　　　　我们从古以来，就有埋头苦干的人，有拼命硬干的人，有为民请命的人，有舍身求法的人，……虽是等于为帝王将相作家谱的所谓“正史”⑤，也往往掩不住他们的光耀，这就是中国的脊梁。& 　　　　这一类的人们，就是现在也何尝少呢？他们有确信，不自欺；他们在前仆后继的战斗，不过一面总在被摧残，被抹杀，消灭于黑暗中，不能为大家所知道罢了。说中国人失掉了自信力，用以指一部分人则可，倘若加于全体，那简直是诬蔑。& 　　　　要论中国人，必须不被搽在表面的自欺欺人的脂粉所诓骗，却看看他的筋骨和脊梁。自信力的有无，状元宰相的文章是不足为据的，要自己去看地底下。　　　　九月二十五日。 【注释】①&选自《且介亭杂文》（《鲁迅全集》第6卷，人民文学出版社1981年版）。本篇最初发表于日《太白》半月刊第一卷第三期，署名公汗。文中加粗的语句，是最初发表在《太白》月刊上时被国民党书报检察机关删去了的。　　②&国联：“国际联盟”的简称，第一次世界大战后于1920年成立的政府间国际组织。它标榜以“促进国际合作，维持国际和平与安全”为宗旨，实际上是英法等帝国主义国家控制并为其侵略政策服务的工具。1946年4月正式宣告解散。九一八事变后，蒋介石即在南京发表讲话，声称“暂取逆来顺受态度，以待国联公理之判决”。国民党政府也多次向国联申诉，要求制止日本帝国主义的侵略，但国联采取了袒护日本的立场。它派出的调查团到我国东北调查后，在发表的《国联调查团报告书》中，指出日本发动九一八事变并非“合法之自卫手段”，但居然承认日本在中国东北的特殊利益。国联对日本的侵略不采取任何制裁的措施。& 　　③&求神拜佛：当时一些国民党官僚和“社会名流”，以祈祷“解救国难”为名，多次在一些大城市举办“时轮金刚法会”、“仁王护国法会”等。& 　　④&“中国人失掉自信力了”：当时舆论界曾有过这类论调，如日《大公报》社评《孔子诞辰纪念》中说：“民族的自尊心与自信力，既已荡焉无存，不待外侮之来，国家固早已濒于精神幻灭之域。”& 　　⑤&“正史”：清高宗（乾隆）诏定从《史记》到《明史》共二十四部纪传体史书为正史，即二十四史。梁启超在《中国史界革命案》中说：“二十四史非史也，二十四姓之家谱而已。”1．对下列句子中加粗词语解释有误的一项是（&&&　　）。 A．信“地”和“物”，还是切实的东西，国联就渺茫，不过这还可以令人不久就省悟到依赖它的不可靠。（渺茫：离的很远，视觉模糊，看不清楚。） B．有拼命硬干的人，有为民请命的人，有舍身求法的人…… （为民请命：为人民保全自己，接触困苦。） C．但不幸的是逐渐玄虚起来了。（玄虚：用使人迷惑的形式来掩盖真相的欺骗手段。） D．现在是既不夸自己，也不信国联，改为一味求神拜佛，怀古伤今了——却也是事实。（怀古伤今：追念古代的事情，因现在的事而悲伤。） 2．选出下列说法有误的一项（&　　&&）。A．《中国人失掉自信力了吗》写于1934年，是鲁迅先生为批驳抗日前途悲观论、鼓舞民族自信而写的一篇杂文，后收入《且介亭杂文集》。 B．“正史”即清高宗（乾隆）诏定从《史记》到《明史》共二十四部纪传体史书为正史，也就是后世所说的二十四史。 C．梁启超在《中国史界革命案》中说：“二十四史非史也，二十四姓之家谱而已。”意思是说：二十四史不是史书，而是二十四个姓氏的家谱罢了。 D．“四书”包括《大学》、《中庸》、《论语》和《孟子》。 3．假使这也算一种“信”，那也只能说中国人曾经有过‘他信力’，自从对国联失望之后，便把这他信力都失掉了。“这句中“他信力”加上引号，所起的作用是（&　　&&）。 A．表示引用&&&&&&&&& B．表示强调 　　C．表示特殊称谓&&&　　& D．表示讽刺否定我不知道哪一步出了问题_弹弹堂吧_百度贴吧
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