蛋白酶的盐析沉淀实验报告_百度文库
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蛋白酶的盐析沉淀实验报告
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实验一 动物细胞蛋白质的提取和含量测定
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3秒自动关闭窗口蛋白质含量测定方法总结
蛋白质含量测定方法总结
08-10-04 &匿名提问 发布
蛋白质纯化方法总结刚才有个同学问我蛋白纯化的方法都有哪些。这是一个很笼统的问题，却是一个大问题。做惯了实验，真要立马回答这个问题，还确实不容易，因为具体实验中常用的只是那么几种方法，就好比只看到树木而见不到森林一样。于是，翻出生化课本来，复习一下理论知识。分离纯化某一特定蛋白质的一般程序可以分为前处理、粗分级、细分级三步。[size=24pt]1.[/size]前处理：分离纯化某种蛋白质，首先要把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来并保持原来的天然状态（[color=#ff1493]如果做不到呢？比如蛋白以包涵体形式存在[/color]），不丢失生物活性。为此，动物材料应先提出结缔组织和脂肪组织，种子材料应先去壳甚至去种皮以免手单宁等物质的污染，油料种子最好先用低沸点（[color=#ff1493]为什么呢[/color]）的有机溶剂如乙醚等脱脂。然后根据不同的情况，选择适当的方法，将组织和细胞破碎。动物组织和细胞可用电动捣碎机或匀浆机破碎或用超声波处理破碎。植物组织和细胞由于具有纤维素、半纤维素和果胶等物质组成的细胞壁，一般需要用石英砂或玻璃粉和适当的提取液一起研磨的方法或用纤维素酶处理也能达到目的。细菌细胞的破碎比较麻烦，因为整个细菌细胞壁的骨架实际上是一个借共价键连接而成的肽聚糖囊状大分子，非常坚韧。破碎细菌细胞壁的常用方法有超声波破碎，与砂研磨、高压挤压或溶菌酶处理等。组织和细胞破碎后，选择适当的缓冲液把所要的蛋白提取出来。细胞碎片等不溶物用离心或过滤的方法除去。如果所要的蛋白主要集中在某一细胞组分，如细胞核、染色体、核糖体或可溶性细胞质等，则可利用差速离心的方法将它们分开，收集该细胞组分作为下步纯化的材料。如果碰上所要蛋白是与细胞膜或膜质细胞器结合的，则必须利用超声波或去污剂使膜结构解聚，然后用适当介质提取。[size=24pt]2. [/size]粗分级分离：当蛋白质提取液（有时还杂有核酸、多糖之类）获得后，选用一套适当的方法，将所要的蛋白与其他杂蛋白分离开来。一般这一步的分离用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。这些方法的特点是简便、处理量大，既能除去大量杂质，又能浓缩蛋白溶液。有些蛋白提取液体积较大，又不适于用沉淀或盐析法浓缩，则可采用超过滤、凝胶过滤、冷冻真空干燥或其他方法进行浓缩。[size=24pt]3.[/size]细分级分离：样品经粗分级分离以后，一般体积较小，杂蛋白大部分已被除去。进一步纯化，一般使用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等。必要时还可选择电泳法，包括区带电泳、等电点聚焦等作为最后的纯化步骤。用于细分级分离的方法一般规模较小，但分辨率很高。结晶是蛋白质分离纯化的最后步骤。尽管结晶过程并不能保证蛋白一定是均一的，但是只有某种蛋白在溶液中数量上占有优势时才能形成结晶。结晶过程本身也伴随着一定程度的纯化，而重结晶又可除去少量夹杂的蛋白。由于结晶过程中从未发现过变性蛋白，因此蛋白的结晶不仅是纯度的一个标志，也是断定制品处于天然状态的有力指标。[size=12pt]蛋白质分离纯化的方法：[/size][size=12pt][size=14pt]一[/size]、[size=10pt]根据分子大小不同的纯化方法[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
1、透析和超过滤[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
2、密度梯度离心[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
3、凝胶过滤[/size][/size][size=12pt][size=10pt][size=14pt]二[/size]、利用溶解度差别的纯化方法[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
1、等电点沉淀和pH控制[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
2、蛋白质的盐析和盐溶[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
3、有机溶剂分级分离法[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
4、温度对蛋白质浓度的影响[/size][/size][size=12pt][size=10pt][size=14pt]三[/size]、[size=10pt]根据电荷不同的纯化方法[/size][/size][/size][size=12pt][size=10pt]
1、电泳[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
2、聚丙烯酰胺凝胶电泳[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
3、毛细管电泳[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
4、等电聚焦[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
5、层析聚焦[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
6、离子交换层析[/size][/size][size=12pt][size=10pt][size=14pt]四[/size]、利用选择性吸附的纯化方法[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
1、羟磷石灰层析[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
2、疏水作用层析[/size][/size][size=12pt][size=10pt][size=14pt]五[/size]、利用配体的特异生物学亲和力的纯化方法[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
亲和层析（affinity chromatography）：[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
a.凝集素亲和层析[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
b.免疫亲和层析[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
c.金属螯合层析[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
d.染料配体层析[/size][/size][size=12pt][size=10pt]
e.共价层析[/size][/size][size=12pt][size=10pt][size=14pt]六[/size]、高效液相层析合快速蛋白质液相层析[/size][/size]
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主要就是凯氏定氮 现在国家出台了非蛋白氮的检测标准 这样有利于监控是否添加非蛋白的氮来源物质
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本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。
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①在鸡蛋白中加入少量蒸馏水
蛋白质_____（能、不能）溶于水
②在鸡蛋白中加入少量浓的硫酸钠溶液
浓的盐溶液能使蛋白质的溶解性_____百度作业帮
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①在鸡蛋白中加入少量蒸馏水
蛋白质_____（能、不能）溶于水
②在鸡蛋白中加入少量浓的硫酸钠溶液
浓的盐溶液能使蛋白质的溶解性____
填写下列实验报告：
①在鸡蛋白中加入少量蒸馏水
蛋白质_____（能、不能）溶于水
②在鸡蛋白中加入少量浓的硫酸钠溶液
浓的盐溶液能使蛋白质的溶解性_____（增大、减小）
③将鸡蛋白溶液加热
蛋白质受热后会_________．
④在鸡蛋白溶液中加入乙酸铅溶液
_______盐能使蛋白质发生化学变化
⑤在鸡蛋白溶液中加入浓硝酸并加热
浓硝酸能使蛋白质发生________变化
⑥在酒精灯上灼烧一块凝固的蛋白质在酒精灯上灼烧一根头发
灼烧含有蛋白质的物质会产生_______的气味．头发中含有____________
①有的蛋白质溶于水，他们是以胶体状态存在的．②当向鸡蛋白中加入少量的浓的硫酸钠溶液时，蛋白质会沉淀析出，发生了盐析．③蛋白质受热会发生凝固．④蛋白质加入如含铅的重金属离子的溶液，会发生变性而凝结．⑤浓硝酸能使蛋白质发生颜色反应，生成黄色溶液．⑥灼烧蛋白质能闻到烧焦羽毛的气味，头发中含有蛋白质，所以在酒精灯上灼烧一根头发，能闻到烧焦羽毛的气味．故答案为：①溶液略显浑浊、能；②溶液变浑浊、减小；③出现白色固体、凝固；④出现黄色固体、重金属盐；⑤出现黄色固体、化学；⑥能燃烧，并有一种特殊的气味、烧焦羽毛、蛋白质．
本题考点：
鉴别淀粉、葡萄糖的方法与蛋白质的性质；实验探究物质的性质或变化规律．
问题解析：
蛋白质的性质很多，我们要熟练掌握：1．具有两性．2．在酸性或碱性的条件下水解，最终形成多种a-氨基酸．3．盐析．4．变性．5．显色：遇浓硝酸显黄色．6．燃烧产生烧焦羽毛的味道．罗汉果蛋白酶的分离纯化及性质研究_百度文库
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蛋​白​质​分​离
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