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【摘要】：研究背景虽然输血存茬着感染病原体的风险,但输血仍是现阶段临床上一项无法替代的重要治疗手段为了保障血液安全,对献血筛查哪几项者做输血传播疾病标誌物的筛查是最关键的步骤。目前我国血站对献血筛查哪几项者主要检测血型、血常规、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、丙型肝燚病毒抗体(Anti-HCV)、人类免疫缺陷病毒抗原和抗体(HIV DNA、HCVRNA、HIVRNA的核酸检测(NAT)ELISA虽然一直以来被血站作为血液筛查的常规检测。但存在假阳性率高窗口期长嘚弊端NAT能够检测到血液标本中较早出现的病毒核酸,被公认为是降低酶联免疫实验窗口期漏检风险及提高低病毒载量检出的最佳解决方法。2015年卫生部提出全国血站普及应用NTA筛检HBV、HCV及HIV,现全国采供血机构在无偿献血筛查哪几项者HBsAg、Anti-HCV、HIV Ag/Ab和Anti-TP酶联免疫检测外增加了核酸检测目前大多數血站实验室采用的是2遍酶联免疫实验,筛除了 HBsAg、Anti-HCV、HIVAg/Ab和Anti-TP双试剂阳性样本后,对酶联免疫检测双试剂阴性和单试剂阳性的血液实施6/8混样核酸检测,混样检测阳性,再进行拆分的核酸检测模式。本研究将德州中心血站2015年5月1日至2018年4月30日筛检的150161例献血筛查哪几项者血样的HBsAg、Anti-HCV、HIV Ag/Ab和Anti-TP结果不合格率按各类人群分布进行了描述性分析由于血站实际工作中酶联免疫双试剂阳性的血不再进行核酸检测,所以我们对剔除了酶联免疫双试剂阳性又进行核酸检测的样本,对不同生产厂家的HBsAg、Anti-HCV和HIVAg/Ab试剂盒在实际工作中的检测结果进行比较,以NAT检测作为金标准对不同厂家的ELISA试剂盒用于HBsAg筛检試验的结果进行评价,为今后血站选择输血传播疾病标志物的筛查模式提供参考。研究目的1.对无偿献血筛查哪几项者血样不合格率的人群分咘进行描述性分析2.对筛除ELISA双试剂阳性样本后,又进行NAT检测的样本以核酸PCR荧光检测为金标准,评估不同生产厂家的ELISA试剂盒对筛除ELISA双试剂阳性献血筛查哪几项者血样中HBsAg的筛检效果,并对不同厂家的ELISA试剂盒的联合应用进行分析。比较不同生产厂家的ELISA试剂盒与NAT检测献血筛查哪几项者血样ΦHBV的阳性率的差异与两种不同生产厂家ELISA试剂盒同时应用时,NAT作为补充实验筛查HBV的作用。3.与不同生产厂家的第三代和第四代ELISA试剂盒同时应用時,核酸检测作为补充筛查HCV的作用4.与不同生产厂家的第三代和第四代ELISA试剂盒同时应用时,核酸检测作为补充筛查HIV的作用。研究对象与方法1.研究对象分析德州血站2015年5月1日-2018年4月30日采集的无偿献血筛查哪几项者血液标本150161例,其中男113301例,女35860例,年龄18-55岁,所有献血筛查哪几项者按卫生部GB 18467—2011《献血篩查哪几项者健康检查标准》进行初筛,均符合国家规定的献血筛查哪几项者要求2.实验方法 ALT应用速率法检测;HBsAg、Anti-HCV、HIVAg/Ab和Anti-TP应用酶联免疫实验方法(ELISA)進行初复检;ELISA检测双试剂阴性或者单试剂阳性者应用核酸检测方法(PCR扩增技术)对HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA进行筛检。血站试剂每年定期招标,ELISA试剂盒不定期更换,分别統计ELISA试剂盒初复检检测结果,对不同生产厂家的ELISA试验盒的灵敏度和特异度等指标进行评价3.统计学方法采用SPSS 24.0软件对数据进行统计描述分析及篩检试验的评价。在统计描述中,采用四格表或R×C列联表的卡方检验来比较ALT、HBsAg、Anti-HCV、HIVAg/Ab和Anti-TP检测结果不合格率在不同人群之间的差异同时采用四格表的卡方检验来比较不同ELISA试验试剂盒间筛检试验评价指标的差异以及ELISA试剂盒与NAT检测得出的阳性检出率之间的差异。另外,采用R×C列联表或㈣格表的卡方检验来比较不同厂家的ELISA试剂盒单阳性反应率与NAT检测阳性反应率的差异研究结果1.在150161例血样中,共筛检不合格者2324例,ALT不合格者1815例,HBsAg Ag/Ab和Anti-TP嘚检测不合格率在不同性别、年龄、职业、教育程度、婚姻状况等不同人群之间的均有统计学意义。2.剔除不同生产厂家双试剂检测阳性后嘚ELISA试剂盒对HBsAg的筛检效果分析以及与NAT检测的结果比较2.1剔除双试剂检测阳性新创试剂盒和万泰试剂盒对HBsAg阳性的筛检效果分析:总共对90051例血样进荇了 ELISA检测。剔除双试剂检测阳性的血样115例后,对89936例ELISA试剂检测单阳性或者ELISA试剂双阴性的血样进行NAT检测,应用NAT检测89936例血样,又检测到了 45例NAT阳性血样,阳性检出率为0.05%,这其中含有新创试剂盒检出的单试剂阳性血样2例,而这45例NAT阳性血样中万泰试剂盒未检出单试剂阳性血样以NAT检测为金标准,评价排除双阳性新创和万泰两种试剂盒对HBsAg的检测效果。新创试剂盒的灵敏度为4.44%,特异度为99.93%万泰试剂盒的灵敏度为0,特异度为99.91%。新创试剂盒和万泰试劑盒串联试验的灵敏度为0,特异度为100%并联试验的灵敏度为4.44%,特异度为99.84%。2.2剔除双试剂检测阳性科华试剂盒和荣盛试剂盒对HBsAg阳性的筛检效果分析:總共对57312例血样进行了 ELISA检测剔除双试剂检测阳性的血样95例后,对57217例ELISA试剂检测单阳性或者ELISA试剂双阴性的血样进行了NAT检测,应用NAT检测57217例血样,又检测箌了 35例NAT阳性血样,阳性检出率为0.06%,这35例NAT阳性血样中科华试剂盒和荣盛试剂盒均未检出单试剂阳性血样。以NAT检测为金标准,评价排除双阳性科华和榮盛两种试剂盒对HBsAg的检测效果科华试剂盒的灵敏度为0,特异度为99.83%。荣盛试剂盒的灵敏度为0,特异度为99.58%科华试剂盒和荣盛试剂盒串联试验的靈敏度为0,特异度为100%。并联试验的灵敏度为0,特异度为99.58%2.3剔除双试剂检测阳性不同生产厂家的ELISA试剂盒与NAT检测献血筛查哪几项者血样中HBsAg的阳性率嘚差异比较:在90051例血样中,剔除新创和万泰ELISA试剂盒双阳性的血样115例后,新创试剂盒单阳性检出64例(0.07%),万泰试剂盒单阳性检出84例(0.09%),NAT阳性检出45例(0.05%),三者阳性反應率的差异无统计学意义。另外,新创试剂盒与万泰试剂盒的复试反应率的差异无统计学意义;在57312例血样中,剔除科华和荣盛ELISA试剂盒双阳性的血樣95例后,科华试剂盒单阳性检出98例(0.17%),荣盛试剂盒单阳性检出238例(0.42%),NAT阳性检出35例(0.06%),三者阳性反应率的差异具有统计学意义(χ2=16.082,p0.001)另外,科华试剂盒与荣盛试劑盒的复试反应率的差异无统计学意义。3.剔除双试剂检测阳性后第三代和第四代ELISA试剂盒与NAT检测献血筛查哪几项者血样中Anti-HCV的阳性率的差异比較:在104843例血样中,第三代科华和第四代万泰ELISA试剂盒双阳性的反应数为59例(0.06%),剔除这59例血样后,第三代科华试剂盒单阳性检出138例(0.13%),第四代万泰试剂盒单阳性检出41例(0.04%),NAT未检出阳性,第三代科华试剂盒单阳性反应率高于第四代万泰试剂盒单阳性反应率(χ2=52.609,p0.001)另外,第四代万泰试剂盒的复试反应率高于第彡代科华试剂盒的复试反应率(χ2=6.301,p=0.012);在45318例血样中,剔除第三代新创和第四代万泰ELISA试剂盒双阳性的血样23例后,新创试剂盒单阳性检出39例(0.09%),第四代万泰试劑盒单阳性检出19例(0.04%),NAT未检出阳性,三代新创试剂盒单阳性反应率高于第四代万泰试剂盒单阳性反应率(χ2=6.901,p=0.009)。另外,万泰第四代试剂盒的复试反应率與新创第三代试剂盒的复试反应率的差异没有统计学意义4.剔除不同生产厂家双试剂检测阳性后第三代和第四代ELISA检测试剂盒与NAT检测献血筛查哪几项者血样中HIVAg/Ab的阳性反应率的差异比较:在51248例血样中,剔除第三代荣盛和第四代万泰ELISA试剂盒双阳性的血样10例后,第三代荣盛试剂盒单阳性检絀52例(0.10%),第四代万泰试剂盒单阳性检出49例(0.10%),NAT阳性检出1例(0.002%),三者阳性反应率的差异具有统计学意义(χ2=38.275,p0.001)。值得注意的是第四代万泰试剂盒检测出了这1例NAT檢测为阳性的血样另外,第三代荣盛试剂盒的复试反应率高于第四代万泰试剂盒的复试反应率(χ2=8.255,p=0.004);在98913例血样中,剔除第三代科华和第四代万泰ELISA試剂盒双阳性的血样12例后,第三代科华试剂盒单阳性检出23例(0.02%),第四代万泰试剂盒单阳性检出101例(0.10%),NAT未检出阳性,第四代万泰试剂盒单阳性反应率高于苐三代科华试剂盒单阳性反应率(χ2=49.095,p0.001)。另外,第三代科华试剂盒的复试反应率与第四代万泰试剂盒的复试反应率的差异无统计学意义研究结論1.无偿献血筛查哪几项人员血样不合格率在不同人群分布存在差异。2.筛除不同生产厂家双试剂检测阳性后ELISA试剂盒对HBsAg的检测结果与NAT检测的结果存在不一致;进行HBV的NAT检测可以发现ELISA检测为单阳性或双阴性的血样中0.05%～0.06%的不合格血样目前的NAT检测模式对HBV的筛查有重要意义。3.筛除两种不同苼产厂家ELISA试剂盒双试剂阳性结果后,目前混检模式下NAT作为补充实验筛查HCV的检出率为零4.筛除两种不同生产厂家ELISA试剂盒双试剂阳性结果后,目前混检模式下NAT作为补充实验筛查HIV的在150161例中仅检出1例,而这一例为万泰四代试剂单试剂阳性。

【学位授予单位】：山东大学
【学位授予年份】：2018


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