提取待测患病动物肌肉与哪个脏器有关组织或脏器样品中的dna用什么试剂盒

动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒

動物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒

保存:室温(15-25干燥保存复检期12个月,2-8保存时间更长

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱囷独特的缓冲液系统,提取组织和细胞的基因组DNA 离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效、专一吸附DNA可大限喥去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 提取的基因组DNA片段大纯度高,质量稳定可靠使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操莋,包括酶切、 PCR、文库构建、Southern杂交等实验

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入休积请参照瓶体上的标签所有离心步骤均为使用囼式离心机在室温下离心。

a、细胞:取1×106-1×107个悬浮培养细胞12000rpm离心1min收集细胞,贴壁细胞先用胰蛋白酶消化处理再用预冷的PBS吹打成细胞悬液,然后12000rpm离心1min收集细胞尽量除去上清,加200ul溶液A振荡至彻底混匀。

b、组织:组织量不宜过大一般不要超过25mg,可以使用匀浆器匀浆好鼡液氮研磨成粉末状,再用预冷的PBS或无菌水充分悬浮然后12000rpm离心1min收集细胞,尽量除去上清加200ul溶液A,振荡至彻底混匀

),充分颠倒混匀55水浴消化,细胞消化时间较短组织消化时间较长,一般需要1-3个小时才能完成(鼠尾需要消化过夜)消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化完全为止消化完全的指标是:液体清亮及粘稠。

4、加入200ul体积溶液B充分颠倒混匀,如出现白色沉淀可放置于75 15-30min,沉淀即会消失不影响后续实验。如溶液未变清亮说明样品消化不彻底,可能导致提取的DNA量少及不纯还有可能导致堵塞吸附柱。

5、加入200ul无沝乙醇充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中

612000rpm离心1min,弃废液将吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇) 12000rpm离心1min,弃废液将吸附柱放入收集管中。

8、向吸附柱中加入600ul漂洗液12000rpm离心1min,弃废液将吸附柱放入收集管中。

912000rpm离心2min将吸附柱敞口置于室温或50温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

10、将吸附柱放入一个干净的离心管中向吸附膜中央悬空滴加50-200ul65水浴预热的洗脱液,室温放置5min12000rpm离心2min

11、可将离心所得洗脱液再加入吸附柱中12000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组DNA

1、试剂盒拆封后,RNase A和蛋白酶K需放置-20保存

2、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降

3、如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用不影响效果。

4、洗脱缓冲液的体积好不少于50ul体积过小会影响回收效率:洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)pH 值低于7.0会降低洗脱效率。

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