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沉香虎头兰、大雪兰正反交及种子无菌萌发研究*
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内容提示：以沉香虎头兰（Cymbidium tracyanum）（黄色素花）与大雪兰（C.mastersii）为父、母本进行正反交，用杂交种子进行无菌萌发研究和种胚发育观察。结果表明：这两种杂交兰花的结实率为60～100%；大雪兰和沉香虎头兰（黄素）杂交种子在1/2MS+6-BA1.0～3.0mg/L+NAA0.5～2.0mg/L无菌条件下的萌发率约为700%；正反交对种子的萌发率没有明显影响；在沉香虎头兰×大雪兰、大雪兰×沉香虎头兰的种子萌发过程中，种胚的发育有两种方式：一是在..
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你可能喜欢大花蕙兰杂交育种研究--《北京林业大学》2007年博士论文
大花蕙兰杂交育种研究
【摘要】：
本试验在北京林业大学科技股份有限公司花卉分公司从日本引进的35个大花蕙兰(Cymbidium hybridum)品种基础上进行，研究工作主要有以下几个方面的内容。一是品种的分类，为科研和生产实践提供较为系统与合理的分类指导依据；二是通过核型分析和系谱检索，明确大花蕙兰的遗传背景，包括其倍性、品种来源、亲缘关系等，为育种时亲本的选配提供理论依据；三是大花蕙兰的花粉活力和人工授粉、果实生长等的研究，开展大花蕙兰杂交育种的基础研究工作，了解大花蕙兰杂交过程中可能出现的问题；四是对得到杂交组合的种子进行非共生萌发研究，从基本培养基、培养条件、添加物等方面入手，建立完整的非共生萌发技术体系；五是利用分子标记技术探索杂种后代的早期鉴定的可行性，筛选出多态性较高的引物，建立高效的扩增体系，通过谱带的判读研究大花蕙兰的某些遗传规律和现象。主要的研究结果如下：
1．形态学分类建立起以亲本来源为一级分类依据，花葶生长姿态、花色、花径(两侧萼瓣间距)、唇瓣形状分别为二级、三级、四级、五级分类指标的分类系统。将引进的大花蕙兰分为二群(附生地生杂交品种群、附生杂交品种群)，两系(直立花葶系、下垂花葶系)，五组(红色组橙色组黄色组绿色组白色组)，三类(大花类、中花类、小花类)，两型(圆唇型尖唇型)，之后的系谱分析基本验证了这个分类系统的科学性。数学分类的方法选用41个性状指标进行观测，对所得到的数据聚类分析，得到以花径为一级分类选择。花色为二级分类选择的分类结果，该结果能部分解释品种的倍性。
2．染色体观察的结果证明大花蕙兰的染色体基数为20(X=20)，引进的品种具有多样的倍性，其中二倍体、三倍体、四倍体的比例大致相当，还有少量的非整倍体。核型分析说明大花蕙兰为对称型核型，核型大多为B型，有少量的A型和C型，这和兰属的其它种是一致的。结合杂交结果，发现当倍性不同的亲本杂交时，倍性高的亲本作为父本具有较高的座果率。核型似近系数表明大花蕙兰品种间的核型比较近似，似近系数0.8。分析不同似近系数的品种作为亲本杂交的结果，发现随两亲本的似近系数增高，杂交成功率和座果率都有增高的趋势。成功的杂交组合亲本似近系数多在0.950～0.980左右。综合考虑核型似近系数和倍性，可以为亲本选配提供依据。
检索英国皇家园艺学会(RHS)60年()的品种(GREX)登录情况，确定引进的大花蕙兰品种涉及13个原生种。美花兰(C．insigne)、碧玉兰(C．lowianum)、独占春(C．eburneum)和虎头兰(C．hookerianum)在这些品种中的遗传贡献较大，其余如红柱兰(C．erythrostylum)、西藏虎头兰(C．tracyanum)等的遗传贡献因品种而异，充分说明了大花蕙兰不同品种的来源和相互之间的关系。根据各原生种对品种的遗传贡献对品种进行分析，引进品种的遗传距离在0.025～0.536之间，杂交时随两亲本遗传距离的增加，杂交的成功率和座果率都有降低的趋势，成功杂交组合亲本的遗传距离多在0.2～0.3左右，这和核型似近系数的结果一致。
检索品种在以往的杂交育种历史中作为亲本参与杂交的情况，可以帮助很好地了解这些品种的育种价值，一定程度上避免亲本选配时的盲目性。
3．花粉离体萌发试验得到大花蕙兰花粉离体萌发的有效培养基为蔗糖30％+硼酸0.03％+甘氨酸0.03％+GA_350mg.L~(-1)+CaCl_20.15％+琼脂0.3％。花粉的活力在干燥和低温的条件下，可以保藏6—12个月。
大花蕙兰适宜的授粉时间为开花后的1～3天，品种间杂交成功率较低，座果组合仅占全部组合的20％左右。其果实生长发育为单“S”形的生长曲线，人工授粉后50～60天和150～170天分别有两次落果高峰，这两次落果高峰分别对应于受精过程和胚的发育。果实脱落的原因主要在于品种亲缘关系的远近和倍性的差异。
4．非共生萌发试验证明大花蕙兰种子萌发适宜的培养基为1／2MS培养基，固体培养或液体培养均可用于大花蕙兰的种子萌发。适宜的培养基pH为5.4，培养基中不需要添加植物生长调节物质。0.2％的活性炭(AC)有益于大花蕙兰的种子萌发，抑制萌发过程中的褐变。培养需在有光条件下进行，培养基中糖的浓度为25g／L。高糖培养基抑制种子的萌发，说明大花蕙兰的球形胚已经脱离了原胚的生长阶段。种子萌发具有明显的群体效应，培养基表面有胚种子的播种密度10—15粒／cm~2萌发率最高。原球茎的茎叶和根的生长发育需在培养基中添加0.6mg.L~(-1)的NAA。通过炼苗移栽，形成共计1560株的杂交后代群体。
5．筛选出多态性较高的8对引物：E03／M08、E04／M02、E04／M03、E05／M01、E07／M01、E07／M02、E07／M06、E08／M01。证明AFLP可以有效地对大花蕙兰的杂种进行早期鉴定，父母本的特征条带大多可以结合到杂种的谱带中。有的杂种谱带会出现特异性条带的增加或者双亲特征谱带的丢失。
通过3年多的大花蕙兰品种间杂交育种实践，总结出从亲本选配，杂交、非共生
萌发、杂种鉴定等环节具有指导意义的指标或技术体系。我国目前大花蕙兰的育种工作才刚刚开始，此研究得到的结果对这项工作的深入进行具有重要的价值。
【关键词】：
【学位授予单位】：北京林业大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2007【分类号】：S682.31【目录】：
ABSTRACT7-10
1 引言15-38
1.1 大花蕙兰概况15-16
1.1.1 大花蕙兰的来源15
1.1.2 大花蕙兰的形态特征15
1.1.3 生物学特性15-16
1.2 兰属育种概述16-22
1.2.1 兰属育种发展简史16-18
1.2.2 育种手段18-19
1.2.3 种子萌发19
1.2.4 我国的兰属育种研究19-20
1.2.5 国外兰属的育种研究20-21
1.2.6 兰属的育种展望21-22
1.3 大花蕙兰的育种22-30
1.3.1 大花蕙兰育种的主要亲本及其分布22-25
1.3.2 主要的育种方法及手段25-26
1.3.3 大花蕙兰的遗传规律26-29
1.3.4 品种选育新动向29-30
1.4 大花蕙兰的生长特性和幼苗栽培30-35
1.4.1 生长特性31
1.4.2 大花蕙兰幼苗的栽培养护31-35
1.5 本课题研究的目的、意义及技术路线35-38
1.5.1 研究的目的和意义35
1.5.2 研究的主要内容和技术路线35-38
2 引进大花蕙兰品种形态特征简介38-44
3 品种分类研究44-55
3.1 品种二元分类44-48
3.1.1 研究方法44
3.1.2 大花蕙兰的品种分类依据44
3.1.3 分类方案44-45
3.1.4 分类结果45-46
3.1.5 讨论46-48
3.2 品种的数量分类48-54
3.2.1 材料与方法48-51
3.2.2 结果51-53
3.2.3 讨论53-54
3.3 本章小节54-55
4 部分大花蕙兰品种的染色体观察及核型分析55-77
4.1 染色体观察55-57
4.1.1 材料55
4.1.2 方法55
4.1.3 试验结果与分析55-57
4.2 核型分析57-73
4.2.1 方法57-58
4.2.2 16个大花蕙兰品种的核型图58-60
4.2.3 16个大花蕙兰品种的核型模式图60-62
4.2.4 16个大花蕙兰的品种的染色体参数62-67
4.2.5 16个大花蕙兰品种的核型参数及核型67-69
4.2.6 核型聚类分析69-73
4.3 讨论73-76
4.4 本章小结76-77
5 大花蕙兰部分品种系谱分析77-99
5.1 材料与方法77-78
5.2 结果与分析78-97
5.2.1 各品种中原生种的贡献率78-80
5.2.2 24个品种的育种简史80-82
5.2.3 24个品种形成过程中原生种参与杂交的世代和次数82-84
5.2.4 对系谱检索结果的分析84-91
5.2.5 大花蕙兰育种进程的主要育种亲本91-92
5.2.6 引进品种中10代内曾经做为杂交亲本参与育种的情况92-94
5.2.7 大花蕙兰品种群的遗传多样性94-97
5.3 本章小结97-99
6 大花蕙兰花粉活性研究99-109
6.1 大花蕙兰花粉离体萌发研究99-106
6.1.1 试验材料99
6.1.2 方法99-102
6.1.3 结果与分析102-105
6.1.4 讨论105-106
6.2 花粉贮藏研究106-108
6.2.1 材料106
6.2.2 方法106
6.2.3 结果与分析106-107
6.2.4 讨论107-108
6.3 本章小结108-109
7 大花蕙兰品种间杂交试验109-115
7.1 材料109
7.2 方法109
7.3 试验结果与分析109-112
7.3.1 试验中的杂交组合109-111
7.3.2 人工授粉后7个月保留下来的杂交组合111-112
7.4 讨论112-114
7.5 本章小结114-115
8 大花蕙兰的果实发育115-121
8.1 大花蕙兰果实的生长动态115-117
8.1.1 试验材料115
8.1.2 试验方法115
8.1.3 试验结果与分析115-116
8.1.4 讨论116-117
8.2 大花蕙兰的落果117-119
8.2.1 试验材料与方法117
8.2.2 试验结果与分析117-118
8.2.3 讨论118-119
8.3 本章小结119-121
9 大花蕙兰种子的非共生萌发研究121-164
9.1 大花蕙兰的果实和种子121-123
9.1.1 材料和方法121
9.1.2 结果与分析121-123
9.1.3 讨论123
9.2 非共生萌发的技术体系研究123-143
9.2.1 材料和方法124-125
9.2.2 不同的采收时期对萌发的影响125-126
9.2.3 播种密度对大花蕙兰种子萌发的影响126-128
9.2.4 生长调节物质对大花蕙兰种子萌发的影响128-130
9.2.5 活性炭对非共生萌发的影响130-132
9.2.6 大花蕙兰的种子萌发对光照的需求132-133
9.2.7 不同培养方式对大花蕙兰种子萌发的影响133-135
9.2.8 不同酸碱度对大花蕙兰非共生萌发的影响135-137
9.2.9 杂交组合对培养基的不同要求137-141
9.2.10 糖的浓度对萌发的影响141-143
9.3 大花蕙兰的种子萌发过程143-144
9.3.1 材料和方法143
9.3.2 结果与分析143
9.3.3 讨论143-144
9.4 萌发后的原球茎在不同培养基上生长效应144-150
9.4.1 材料与方法144-145
9.4.2 结果与分析145-149
9.4.3 讨论149-150
9.5 不同培养基对出瓶苗质量的影响150-160
9.5.1 材料与方法150
9.5.2 结果与分析150-160
9.5.3 讨论160
9.6 后代群体的选留160-161
9.6.1 后代群体数量160
9.6.2 选择160-161
9.6.3 试验形成的后代群体161
9.7 大花蕙兰非共生萌发中应注意的问题161-162
9.7.1 从萌发培养基转接生根培养基161
9.7.2 褐化161-162
9.7.3 出瓶162
9.8 本章小结162-164
10 部分大花蕙兰品种及杂种后代的AFLP分析164-177
10.1 材料与方法164-170
10.1.1 试验材料及其来源164-165
10.1.2 主要试剂165
10.1.3 DNA的提取和纯化165-166
10.1.4 AFLP操作流程166-170
10.1.5 结果统计与数据分析方法170
10.2 结果与分析170-175
10.2.1 品种和杂交后代的聚类结果170-174
10.2.2 品种亲本和杂交后的谱带比较174-175
10.3 讨论175
10.4 本章小结175-177
11 结论与建议177-181
图版181-183
附录183-185
参考文献185-191
个人简介191-193
导师简介193-195
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