2015年动物微生物教学实习报告
2015年动物微生物教学实习报告
　　动物微生物实习报告　　任务一 细菌性病原的实验室检查　　1、目的：熟悉细菌性病原的实验室检测程序、掌握其操作技能，学会其结果判定方法，能够对各项检测结果进行综合分析，得出结论，以指导临床生产。　　2、材料：　　(1)疑为大肠杆菌感染的病料;　　(2)麦康凯培养基、普通琼脂培养基、三糖铁培养基、糖发酵管(葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖)、蛋白胨水(MR-VP)制备方式见附录。　　(3)革兰氏染色液、　　(4)药敏片(青霉素、链霉素、磺胺嘧啶钠、卡那霉素)　　3、检测流程：　　(1).将抹片放在干净的实验台上，滴加生理盐水数滴并用接种环涂抹开，　　(2).再取少量的菌种用同样的方法涂抹在抹片上，在上述准备好的抹片上，进行革兰氏染色　　(3)加草酸铵结晶紫染色液，染1～3min,水洗　　(4)滴加革兰氏碘液酶染，时间1～2min后水洗　　(5)加95%酒精脱色至无色，最后滴加复红溶液30s左右，水洗，吸干后镜检　　4、检测结果：　　①革兰氏染色结果：革兰氏阴性菌，染色后为红色，细菌形态为短小的杆状，单个存在 ②分离纯化结果：　　(1)分离培养：细菌的分离培养取少许病理材料直接加入培养基中，置恒温培养箱中培 24-48h后，可取少量培养液作划线分离培养。　　(2)纯化培养：进行斜面纯化移植时左手应同时握住原培养管和待接种管，右手小指和手掌边缘夹住一个棉塞，无名指和中指夹住一个棉塞，必要时中指和食指还可夹住第三个棉塞打开试管，保持试管口在火焰上方进行操作，在斜面上从试管底部向试管口作“Z”字形划线，接种完，液体培养基的纯化移植同液体培养基初次分离培养。　　麦康凯培养基：生长茂盛，生成红色和白色菌落和部分单个菌落，表面光滑，透明。 普通琼脂培养基：生长茂盛，生成乳白色菌落，表面光滑，透明。　　③生物化学实验结果：圆形边缘整齐，表面光滑，半透明，小凸起中等大小光滑型菌落在麦康凯培养基上生长茂盛，形成革兰氏阴性的红色菌落大多糖发酵管中产酸或产气。 三糖铁培养基：　　糖发酵管(葡萄糖、乳糖、)：观察得乳糖管产酸、产气;蔗糖管产酸、产气。　　蛋白胨水(MR-VP)：　　5、检测结论：革兰氏阳性菌(蓝紫色)革兰氏阴性菌(红色)观察大小形态都均等，说明细菌较纯。　　任务二 病毒的禽胚培养方法　　1、目的：掌握病毒的禽胚培养方法。　　2、材料：7-9日龄鸡胚;NDV;　　3、方法：　　(1)检查鸡胚，确定其是否符合接种要求。　　剔除白蛋;圈定气室;确定胚眼点;鸡胚活力检查。　　(2)病毒接种。　　a.左手握住鸡胚，气室向上，用酒精给鸡胚消毒　　b.用酒精或灼烧法消毒锥子且在气室上锥一小孔　　c.用一次性注射器吸取病毒0.1～0.3ml偏向胚眼点从孔内注入，取出注射器后用蜡烛堵住小孔，然后将注射器高浓度消毒液彻底消毒，销毁　　d.将鸡胚至恒温箱直立孵化　　(3)鸡胚健活状态检查。　　a.首次观察，观察鸡胚眼点是否用运动现象，若有则继续培养，如无则放入0～4摄氏度冷藏　　b.如上步所述继续观察3个晚上　　(4)病毒收取及后期处理。　　①病毒收取　　a. 直立鸡胚，消毒气室和镊子，用镊子反面将气室外壳砸碎，用灭菌镊子夹起并撕开气室　　中央的绒毛囊膜，　　b. 用灭菌吸管吸取上清液，置于试管　　②后期处理 3000rpm,5min 取上清，-15℃保存。　　任务三 血清学实验　　目的：理解血清学实验的基本原理，掌握其操作方法及结果判定。　　试管凝集(牛布鲁氏菌抗体检测)　　材料：试管架、凝集管、吸管(5ml、1ml、0.5ml)、生理盐水、玻板、25μl移液器(配带滴　　头)、被检血清、温箱、布鲁氏菌标准阳性血清和阴性血清。　　方法：(1)每份血清用5个试管，另取对照管3支，置于试管架上，如带检血清多时，对照　　只需做一份。　　(2) 按表取0.5%石碳酸生理盐水，第1管加入2.3ml，2~5管加入0.5 ml，然后令取吸管吸取被检血清0.2 ml，加入第1试管中，并反复吸吹3次将血清与生理盐水充分混合均匀，吸出1.5 ml弃之，再吸出0.5 ml加入第2管，混合均匀吸出0.5 ml加入第3管，依次类推至第5管，混匀后吸出0.5 ml弃去。第6管中不加血清，第7管中加1:25稀释的布鲁氏菌阳性血清0.5 ml，第8管中加1:25稀释的布鲁氏菌阴性血清0.5ml (取阳性血清，阴性血清应另换吸管)。　　(3)将布鲁氏菌试管凝集抗原用 0.5%石碳酸生理盐水稀释20倍，在各管中分别加入0.5ml，加完后，充分震荡，放入37℃温箱中24h，取出观察并记录结果。+++结果观察：将反应板倾斜成45度角，沉于管低的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集;如果孔低的红细胞铺平孔低，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。　　结果：以产生明显凝集(++)的血清最高稀释度为其效价。判定标准：　　++++ 大凝集块，液体透明，为100%凝集。　　+++ 凝集片明显，液体较透明，为75%凝集。　　++ 凝集片可见，液体不太透明，为50%凝集。　　+ 液体浑浊，少量细菌凝集，为25%凝集　　结论：经试验观察，判定其反映强度为(++)的牛布鲁氏菌抗体在1:100稀释度为最高稀释倍数。　　病毒的血凝及血凝抑制实验　　材料：PH7.2 0.01mol/L PBS或生理盐水，1%鸡红细胞悬液、新城疫病毒液、新城待检血清、：pH7.2微量血凝板、微量移液器、微量振荡器、温箱、离心机、天平、注射器。 方法：(1)血凝实验　　1,、 1%鸡红细胞悬液的制备 采成年健康鸡血 假如有抗凝剂的离心管中,用20倍量pH7.2 0.01mol/L PBS磷酸缓冲盐水洗涤3~4次，每次以200r/min离心3~4min,最后一次5min。每次离心后弃去上清液，并彻底去除白细胞，最后用PBS 稀释成1%红细胞悬液。　　(1) 用微量移液器向反应板没孔分别加入PBS50μl (2) 换一吸头吸取50μl移入第2孔，混匀后取50μl移第3孔，依次倍比稀释到第11孔，　　第11孔中液体混匀后从中吸出50μl弃去。第12孔不加病毒抗原，做对照。　　(3) 另换一吸头吸取1%鸡红细胞悬液依次加入1~12个孔中，每孔加50μl. 加样完毕，将反应板置于微型振荡器上震荡1min，并放于37℃保温箱中作用15~30 min取出，观察并判定结果　　结论：该血清对新城疫病毒液具有凝集能力，凝集价为2　　⑵血凝抑制试验　　⑴用微量移液器加PBS，1~11孔，每孔加50μl　　⑵换一吸头吸取待检血清50μl置于第1孔PBS中，挤压混匀后吸50μll移入第2孔，　　依次倍比稀释至第10孔，弃去50μl。11孔为病毒对照，12孔为盐水对照　　⑶用微量移液器吸取稀释好的病毒液，向1 ~11孔中分别加50μl然后震荡1min，并放于37℃保温箱中作用5 ~10 min取出.　　⑷用微量移液器加1%鸡红细胞悬液每孔加50μl. 将反应板置于微型振荡器上震荡15~30S。　　(单位：ml)　　注：+++ 表示完全凝集 ++ 表示不完全凝集 -表示不凝集　　观察结果：将反应板倾斜成45度角，沉于管低的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者，表　　8　　明红细胞未被或不完全被病毒凝集;如果孔低的红细胞铺平孔低，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。　　病毒液的HA效价1512，HI试验时，病毒抗原液50μl内须含8个凝集单位，则应将病毒液作成512/8=64倍的稀释液。 能将8单位病毒物质凝集红细胞的作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的红细胞凝集抑制效价，用被检血清的稀释倍数或以2为底的对数表示。　　结论：该血清的红细胞凝集抑制效价为：64倍　　实习收获：1：从本次实习过程中使我认识并且了解了细菌性病原的实验室检测程序，操作　　方法和判定方法，并且能对检测结果进行简单分析。　　2：在对病毒禽胚的培养过程中使我熟悉掌握了禽胚病毒接种的方法和操作技巧。 3：通过血清学实验使我理解了其基本原理，并且掌握了操作方法和判定结果。 4：熟悉掌握了血凝及血凝抑制实验的操作原理及结果判定。　　实习建议：1：接种环或接种针在挑取菌落之前应先在培养基上无菌落处冷却，否则会将所　　挑的菌落烫死而使培养失败。　　2：操作应遵守要求，注意安全　　3：使用试剂时，应该注意节约　　4：禽胚接种时，应注意密封好。　　2013年动物微生物实习报告　　饲料01班 章 昭 2013年6月
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鸡血干什么用的？？？？？？
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(《别录》)
【来源】为雉科动物家鸡的血。动物动物形态详&鸡肉&条。
【化学成分】红细胞数及血红蛋白含率，比牛、猪等低，鸡血含血红蛋白10.3克／100毫升，而牛、猪等，都在13克／100毫升左右。鸡的红细胞每克干物含维生素K8DamGlavind单位，血浆每克干物含20D.G.单位。
【性味】咸，平。
①《别录》：&平，无毒。&
②《纲目》：&咸，平，无毒。&
③《医林纂要》：&鸡冠血：咸，温。&
④《本草再新》：&鸡血：味辛，性热，无毒。鸡冠血：味甘，性温，无毒。&
【归经】《本草再新》：&入心、肝二经。&&鸡冠血：入肝、肺、肾三经。&
【功用主治】祛风、活血、通络。治小儿惊风，口面歪斜，痿痹，折伤，目赤流泪，痈疽疮癣。
①《别录》：&乌雄鸡血：主踒折骨痛及痿痹。黑雌鸡血：主中...
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药用植物栽培学――实习报告
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